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毛细管电泳在蛋白质分析中的应用 生技1202 孙丰增 2012304200614 引言 毛细管电泳是将电泳和色谱有机地结合在一起的快速分离技术，具有其分离效率高 ,分析速度快 ,样品用量少 ,容易实现自动化等优点，被广泛应用在生物大分子物质分析中。自从Jorgeson 和 Lukas 于20世纪80年代初创立以来 ,毛细管电泳就很快成为分析化学领域的前沿课题之一。 蛋白质是一切生命活动的基础，是最重要的生物大分子物质，但由于其种类繁多 ,结构复杂 ,样品量少 ,制备、浓缩、分离比较困难 ,用传统分离分析方法效率很低，运用毛细管电泳技术便可以很好解决这些问题。 关键词：毛细管电泳 应用 蛋白质分离 蛋白质分析 正文 毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。。 图一 与传统的分离分析方法相比,CE具有其独特优点:1.高灵敏度，常用紫外检测器的检测限可达 10-13到10-15mol , 激光诱导荧光检测器则达 10-19到10-21mol;2.高效率,其理论塔板数每米为几十万,高者可达几百乃至千万 ,而高效液相色谱法 影响毛细管电泳分辨率的因素主要有工作电压、溶液PH、缓冲液种类和浓度、离子强度以及毛细管内壁处理。 蛋白质是构成生物体的一类重要的有机含氮物质，是生命的物质基础。蛋白质是由氨基酸组成的，是两性电解质，在一定的PH条件下能解离为带电的基团而使蛋白质带电，在电场中发生定向迁移。 毛细管电泳分离蛋白质的方法主要有： (1)涂层去活分离蛋白质，如采用甲基纤维素、硅烷、环氧二醇，麦芽糖、聚乙二醇．聚醚、聚丙酰胺等涂层物质。Ren及同事在聚乙烯丙二醇表面再键合环氧树脂，该涂层在pH为4—1l时均稳定，且可减少电渗流，对于碱性蛋白质，分离效率可提高1000倍，而涂层不易损失。 (2)动态分离蛋白质，如采用添加非离子表面活性剂或阳离子表面活性剂，采用高离子强度和两性离子，添加聚乙二醇、二氨基丁烷等其它添加剂。Verzol报导了在1.0mmol精胺存在下，蛋白质与毛细管内壁间的吸附作用可减少90％。Sjodal在分离缓冲液中加入阳离子表面活性剂，可从磷虾的溶解液中分离出50种蛋白质。 (3)其它分离方法，如毛细管串联法、毛细管等电聚焦法、C1TP--CZE串联法、毛细管凝胶电泳法等。 毛细管电泳的分离模式有多种，包括毛细管区带电泳（CZE）、毛细管凝胶电泳（CGE）、毛细管胶束电动色谱（MECC）、毛细管等电聚焦（CIEF）、毛细管等速电泳（CITP）。 目前较为常用的主要为毛细管区带电泳和毛细管凝胶电泳。 1.毛细管区带电泳 毛细管区带电泳(CZE)是基于被分离物质的荷质比差异，在电场力作用下在缓冲溶液中的迁移速度不同，以使各组分达到分离。它是毛细管电泳中最简单、最基本、使用最广泛的分离模式，通常把它看成其它各种分离模式的母体。CZE法是根据被分析物的质荷比不同, 将其分离。所以对于那些结构相似,但电荷不同的多肽蛋白,可以通过调整pH值,改变溶质电荷,改变淌度,使其得以分离。一系列在所有 pH条件下具有相同净电荷但大小不同的多肽,可以利用CEZ很容易分开, 并且效率很高 (N=110000 ～17 000 0)。Messana用CZE分离红细胞中亚硝基谷胱甘肽，亚硝基谷胱甘肽可与还原及氧化的谷胱甘肽分离并定量测定。李克等研究了CZE分离人血清蛋白质的电泳行为，并建立了分离血清蛋白质的CZE方法。 但分离带正电荷多肽蛋白的一个 主要问题是它们容易吸附到石英毛细管内壁上,导致峰形变宽,区带变形,分离效率低,重复性差。 目前有以下几种方法可减少吸附： 1.1使用低 pH 缓冲液。 1.2选择pH值高于等电点的缓冲液。 1.3向电解质溶液中加入碱金属离子缓冲液中加入高浓度两性离子。 1.4缓冲液中加入高浓度两性离子。 1.5使用中性亲水性物质对管壁进行化学改性以遮掩硅羟基。 1.6向缓冲液中加入阳离子表面活性剂。 1.7运用外加电场,可直接控制电势和电渗流,从而可控制多肽蛋白的管壁吸附。 2.毛细管凝胶电泳 毛细管凝胶电泳(CGE)是将凝胶电泳对生物分子的高效分离能力与毛细管电泳的快速、微量和定量相结合。其原理是基于被测组分的荷质比和分子体积不同而进行分离。 目前，毛细管凝胶电泳(CGE)绝大多数局限于蛋白质分子量的测定, 测定过程中蛋白质需被变性处理, 很少有应用CGE分离分析活性蛋白质的报道，然而，现代生命科学最重要的是分离具有生物活性的的蛋白质，并对其进行分析。 例如：使用一种或两种混合的部分交联聚丙烯酰胺凝胶(semi-CPAs)进行非变性蛋白质的CGE分离, 不仅实现了碱性蛋白质的基线分离, 同时发现这种材料具有良好的动态涂覆毛