103-2学年度仪器分析书面报告姓名：许淑晴学号：4A240073组别.DOC

103-2學年度書面報告 書面報告題目： 一、原理 核磁共振是將核磁共振現象應用於測定分子結構的一種譜學技術。目前，核磁共振波譜的研究主要集中在1H（氫譜）和13C（碳譜）兩類原子核的波譜。人們可以從核磁共振波譜上獲取很多信息，正如同紅外光譜一樣，核磁共振波譜也可以提供分子中化學官能團的數目和種類，但除此之外，它還可以提供許多紅外光譜無法提供的信息。核磁共振波譜對自然科學研究有著深遠的影響，人們不僅可以藉助它來研究反應機理，還可以用來研究蛋白質和核酸的結構與功能。供研究的核磁樣品可為液體或固體 利用具有自旋角動量的原子核在磁場下能階分裂的一基本現象所發展出來的。一般磁矩與其自旋角動量a〉有關m=g1a=g1Ihg1: 磁轉比magnetogyric ratio〉〉，氫核的自轉量子數I〉為1/2，磁矩m=gHIh此時gH=2.6753xl04?radians sec-1?guass-1在古典觀念上如同一個帶電球體自旋，因此具有磁矩而與外加磁場作用，其所允許之量子態為2I+1等於2個，即是m磁量等於?m1/2gHh?可想像成順磁場和逆磁場約兩個能態在無外加磁場下，這二個量子態能量相等degeneracy〉，因此也就無法得核磁共振，但若加入一個外加磁場和磁量作用，此二個量子態便能分裂，它們之間形成了一個能量差，依照波茲曼分配率，此種磁核在高能階狀態的分佈較少，在低能階狀態的分佈多，我們舉一個例子來說明此一分佈，如果在室溫25oC〉下有一試料含一莫耳之氫核放置在23500高斯約地磁之3萬倍之磁場中Ho=23,500G〉。另外也可以研究分子結構、各種分子、動力學或分子動力學之間的相互作用、生物混合物的組成或合成解決方案或複合料。活性分子大小各異從小型有機分子或代謝物到中型肽或天然產品，直到分子重量達數十a的蛋白質。 NMR 與其他結構和分析技術相輔相成，例如X 射線、結晶學和質譜分析法。 NMR 的優點在於其具備獨特的能力，允許對液態和固態分子進行無損和定量研究，並允許研究生物體液 目前的核磁共振儀主要分為兩種：連續波(CW)與脈衝式(FT)NMR連續波(CW)NMR：此種是固定射頻頻率而逐漸改變外加靜磁場強度。在不同化學環境下，不同官能基上的原子核會有不同的旋進頻率。當磁場強度改變時旋進頻率會隨之改變，而射頻與旋進頻率一致時就會產生共振訊號，其缺點是靈敏度低。脈衝式(FT)NMR：利用較寬的脈波，利用一個時間短且強度大的電磁波脈衝來激發原子核，所以可同時激發一個大範圍旋進頻率下的所有原子核。，再經電腦處理，由時間範疇傅氏轉換，即得光譜。通常脈波相間的時間為數秒或十幾秒，假若試藥的濃度低，一次脈波所得的信號太弱，則可使用多次脈波，由電腦處理，將信號累積後，再由記錄器繪出光譜。FT 型儀器對於低濃度試料的測定比裝配著累積信號用電腦設備的 CW型，省時約數十倍至百倍。碳-13 核磁共振光譜：13C 在自然界的碳中只占 1％，使得氫核磁共振光譜太複雜而難以分析。又很幸運地有 1％的 13C，使人們能測得碳-13 核磁共振光譜，它的核迴旋磁比率 γ 為氫核的 1/4（靈敏度與 γ3 成正比），因此同一部儀器測碳-13 核磁共振光譜的靈敏度約為測氫核磁共振光譜的 1/6400。由於先天不足，CW 型核磁共振儀無法測一般化合物碳-13 核磁共振光譜。過去十年來，由於 FT 型儀器的商業化，才使碳-13 核磁共振光譜的應用受到廣泛的注意。化合物中不論是小分子或大分子，天然的或合成的，絕大部分是有機化合物或含有有機部分，由氫核磁共振光譜可推知接在碳上氫的化學環境，而由碳-13 核磁共振光譜可直接推知碳的化學環境；二者相輔相成，為重要的分析方法。 三、儀器應用 利用核磁譜研究蛋白質，已經成為結構生物學領域的一項重要技術手段。核磁都可獲得高解析度的蛋白質三維結構，不過核磁常局限於35kDa以下的小分子蛋白，儘管隨著技術的進步，稍大的蛋白質結構也可以被核磁解析出來。另外，獲得本質上非結構化（Intrinsically Unstructured）的蛋白質的高解析度信息，通常只有核磁能夠做到。蛋白質分子量大，結構複雜，一維核磁譜常顯得重疊擁擠而無法進行解析，使用二維，三維甚至四維核磁譜，並採用13C和15N標記可以簡化解析過程。另外，NOESY是最重要的蛋白質結構解析方法之一，人們通過NOESY獲得蛋白質分子內官能團間距，之後通過電腦模擬得到分子的三維結構。 20 種 L 型胺基酸串聯而成，每一胺基酸有其特定的架構。骨架在空間上的折疊，而形狀作蛋白質的結構。由於不同胺基酸邊鏈各異，也相對的影響其骨架結構。因此蛋白質的結構又可區分為骨架結構及邊鏈的結構。骨架結構決定蛋白質立體空間的摺疊，而邊鏈的結構，決定蛋白質的特定功能。因此，只要能準確地決定每一胜面在空間