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人牙髓干细胞体外培养和诱导分化的实验研究毕业论文
人牙髓于细胞体外培养和诱导分化的实验研究
中,37。C中孵育1.5小时,期间不断振荡,随着消化时间地延长,液体逐渐变混
浊,最终看不到成形的牙髓组织。1200转,离心5分钟。弃上清,Hanks液清洗
两遍后,细胞悬液用100目细胞筛过滤,用完全培养基(含20%胎牛血清,0.5
u
%hepes,2mmol/L左旋谷氨酰胺,100u/ml青霉素,100
g/ml链霉素,Ph7.2)
将细胞混匀,接种于25cm2细胞瓶中,置37
9C5%C02培养箱内培养。@HE染
色观察细胞形态,免疫组化法检测细胞波形丝蛋白和碱性成纤维细胞生长因子及
平滑肌肌动蛋白的表达。③细胞培养14天后终止培养,4%甲醛固定15分钟,
B一
吉姆萨染色计算细胞集落形成率。④20%o--MEM培养基中加入lOmmol/L
甘油磷酸钠、10_8mol/L地塞米松和50u
g/ml维生素C诱导细胞向成牙本质细胞
分化,并检测培养液中碱性磷酸酶的表达水平。⑤20%n.MEM基础培养基中加
gt
入0.5mmol/L1一甲基~3一异丁基一黄嘌呤、0.5mol/L氢化可的松和60“mol/L
吲哚美辛诱导细胞向脂肪细胞分化。油红0染色鉴定。
结果:①I型胶原酶消化后的细胞第二天贴壁生长,细胞开始增殖,呈长梭
形集落样生长,细胞个体较小,细胞约15左右达到80%,E合,并可传代。②HE
染色见细胞体积较小,细胞核较大的特点,有较多的双核细胞,细胞浆呈细网状
相连,细胞问的界限不清。细胞表型免疫组化鉴定波形丝蛋白、I型胶原、碱性
成纤维细胞生长因子、o一平滑肌肌动蛋白阳性。③细胞增殖率较高,集落形成
率均数约为1.5—3.0个/104细胞。④细胞在条件培养基作用三周左右,形成细胞结
节,ConKossa氏银染色法显示细胞结节已经矿化形成矿化结节,培养液中碱性
磷酸酶(ALP)水平在第1次换液时较高,但随之培养液中的ALP水平很快下降;
到第6次换液时,ALP水平最高,以后逐渐下降。⑤细胞培养四周左右,细胞
胞浆增大,胞浆有透明的脂滴形成,油红O染色脂滴呈橙红色,证实已经诱导
分化为脂肪细胞。
结论:①采用I型胶原酶消化法在体外分离培养了人牙髓干细胞,分离的
细胞呈集落样生长,具有快速生长的特性。有强的增殖能力。②牙髓干细胞在
If
人牙髓十细胞体外培养和诱导分化的实验研究
含诱导因子地塞米松、B一磷酸甘油钠和维生素c的条件培养基中可以形成
矿化结节,碱性磷酸酶染色、钙化结节VonKossa染色均为阳性。③牙髓干细
胞在含1~甲基一3一异丁基~黄嘌岭、氢化可的松和吲哚美辛的成脂条件培养
基中可向脂肪细胞分化,油红O染色阳性。
关键词:牙髓干细胞,细胞培养,诱导,分化
III
人牙髓干圳胞体外培养和诱导分化的实验研究
Invitro of
culture
exprimentalstudy andinductionof
differentiationof
humandentalstemcells
pulp
Medicine
Major:Oral
Ren
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