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3．1．2I PG胶条的平衡：
胶条长度(cm)建议平衡液体积(m1)／条溴酚蓝溶液(u1)
7 2．5．5 12．5．25
11 5．10 25．50
13 5．10 25．50
18 10 50
24 15 70
3．I．3 r仪器等电聚焦电泳的运
TPG胶条的电泳：设置IPGpho
行参数。
温度 20。C
最大电流 0．05mAr IPG
pe strip
样品体积 mm长IPG
350¨I(180 strip)
电压 时间
30V 0—12hou
rs(溶胀)．
200V hOUr
500V hOU
r．
500．8000V10min
8000V ；hoU hou
rs(IPG4-7)：2rs(IPG
4
3．2 第二相SDS电泳
向合适的垂直电泳槽。灌胶前加入TEMED和过硫酸铵，室温下至少聚
合3小时。
3．2．2垂直电泳：电泳槽中装满电泳缓冲液，调节温度为15。C；
将平衡好的lPG胶条放置于SDS胶面上，充分结合，上面覆盖琼脂
糖溶液；将胶盒插入电泳槽中，开始电泳。
运行条件
|肘廊 电压 电流 汹率 温度
I I
8h 150V 150mA W 15。C
|50
11 |
3。3 2-DE胶蛋白质点的检测
3．3．1考马斯亮兰染色：固定；染色；漂洗；稳定。
3．3．2硝酸银染色：固定；增敏；漂洗；银染；漂洗；染色；停止
漂洗。
3．4 凝胶图像分析：
用D2000
Unisean扫描仪(Tsinghua
Master2DEliteVersion
3．01分析软件对图像进行背景消减，斑点检测和匹
配。
四、MSoG双向电泳技术
将两条13cmIPG胶条酸碱两侧末端分别去处约1cm，使两条
13cmIPG胶条在一块SDS胶上同时进行第二向垂直电泳。
第一向通用型杯上样方法：80ug蛋白样品。
第二向垂直电泳运行条件：第一步：4W／块胶，45分钟：第二步：
20W，块胶，5小时30分钟；温度：20。C。
其它同上。
五、质谱技术
切点；清洗；脱色；脱水和干燥；还原；乙酰化；清洗；酶切；提取多肽；冷冻
干燥；蛋白质重溶；基质溶液；上样铺扳。
六、数据库查询
应用ProFound搜索程序，数据库查询，蛋白质数据信息处理。
结果
双向凝胶电泳结果：提取Acc一2和Acc—M细胞系的总蛋白质，应用高
通量双向凝胶电泳分离蛋白质，第一
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