组胺H3 受体对垂体瘤AtT┐20细胞分泌ACTH的调节作用论文.docVIP

　　组胺H3 受体对垂体瘤AtT┐20细胞分泌ACTH的调节作用论文 谢建军，罗晓星，赵德化 【关键词】组胺H3,.freelolL -1）作用8h能明显促进ACTH的释放，释放量为1920μgL-1，与同时间对照组（780μgL -1）相比.freelide所拮抗，而H1受体和H2受体拮抗剂均不影响R-（α）-MeHA的效应.R-（α）-MeHA作用8和24h，对细胞增殖无明显影响.用G蛋白失活剂NEM预先处理细胞后，取消了R-（α）-MeHA增强AtT-20细胞ACTH分泌的效应.结论特异性激动组胺H3受体后能引起兴奋-分泌耦联过程，其信号转导过程中有G蛋白的参与. KeyineH3receptors;AtT-20cells;adrenocor-ticotropin;Gprotein Abstract:AIMToinvestigatethesignaltransductionmech-anismofhistamineH3receptor.METHODSTheadrenocor-ticotropichormone（ACTH）levelsofsupernatantsonAtT-20cellsfromthepituitaryglandtumoreasuredbyra-dioimmunoassayatthegiventimeafterhistamineagonistsinistratedandtheeffectsofR-（α）-methylhistamineonthecellsproliferationethylhistamineincreasedthereleaseofACTHintime-dependentmanner.Itincreasedsignificantlyafteradministratedreagents8hethylhistamineandtheH2agonistimpromidineore，thisresponseide，anH3re-ceptorspecificantagonist，butnotbytheH1andH2antago-nistchlorpheniramineandcimetidine.R-（α）-methylhis-taminehadnosignificantinfluenceoncellproliferationentaleimide（NEM）couldabolishtheeffectsofR-（α）-methylhistamineonthereleaseofACTH.CONCLUSIONSpecificactivationofH3receptorcouldevoketheexcitation-secretioncouplingprocess，andGproteinmightbeinvolvedinthesignaltransduction. 0引言 组胺H3受体是1983年发现的一种组胺受体新亚型［1］，作为突触前自身受体和异身受体，广泛分布于中枢与外周多种神经元末梢的突触前膜，负反馈性调节神经递质的释放2，3］.研究表明，激动H3受体可调节中枢和外周神经系统多种神经递质的释放［4-6］.H3受体是一类对中枢和外周器官活动具有重要调节作用的受体体系.目前，H3受体信号转导的机制尚不明确［7］.根据文献［8］的报道，我们利用高表达组胺H3受体的垂体瘤AtT-20细胞作为观察系统，观察了三种组胺受体激动剂与拮抗剂对细胞分泌ACTH的影响.实验证明，此研究系统灵敏、准确、可靠，可作为研究组胺H3受体信号转导机制的有效研究系统.并在此基础上，初步探讨了G蛋白在组胺H3受体信号转导机制中的作用. 1材料和方法 1.1材料 垂体细胞株AtT-20购自中国科学院上海细胞生物学研究所（从美国ATCC引进），RPMI1640购自Gibco公司，新生牛血清（NBS）购自杭州四季青生物工程材料研究所，ACTH检测试剂购自天津德普生物技术和医学产品有限公司，H3受体激动剂R-（α）-Methylhistamine（R-（α）MeHA）购自Sig-ma公司. 1.2方法 复苏冻存的垂体细胞株AtT-20，以含100mLL-1新生牛血清的1640培养液接种于培养瓶中，置于950mLL-1空气和50mLL-1CO2孵箱内，24h后换液，以后每2～3d更换1次培养液.一般4～6d长满，以2.5gL-1胰酶消化后，按12或13传代.将AtT-20细胞消化分散后，以每孔约2×105铺于48孔培养板中，给药后按照时间点收集每孔上清液，保持0～4℃条件下离心以去除脱落细胞，将上清液按照试剂盒操作步骤进行放免测定.用放免γ测量仪及系统分析软件进行分析.通过内插法从lo