细胞凋亡与肝脏疾病论文.docVIP

　　细胞凋亡与肝脏疾病论文 .freelmedcelldeath，PCD）。细胞凋亡的特点:（1）细胞变小，核固缩，细胞膜完整。（2）核碎裂，DNA断裂成180～200bp，而且有蛋白质和mRNA的合成。（3）膜包绕的凋亡小体形成（在肝细胞称为Councilman小体）。（4）凋亡小体被邻近巨噬细胞吞噬，这整个过程进展非常快，由数分钟到几个小时［1］。（5）一般周围无炎症反应，但如果凋亡速度大于清除速度，则组织结构被破坏而且伴随炎症反应［2］。与凋亡不同，坏死是一个被动过程，坏死细胞变大，核溶解，膜通透性改变，线粒体结构变化，DNA随机断裂，其间没有蛋白质和mRNA的合成，坏死周围有炎症反应。1.2检查方法（1）对细胞凋亡形态学的观察有HE染色光镜观察以及电子显微镜、相差显微镜、共聚焦激光扫描显微镜检查。（2）对DNA降解片段的分析有琼脂糖凝胶电泳检测DNA以及SouthernBlotting方法。（3）荧光标记膜蛋白V的检测［3］。（4）流式细胞技术（FCM）可以对活体或已固定的凋亡细胞进行定量分析。（5）末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记术（TUNEL）。（6）免疫组化。2凋亡机制细胞凋亡的生化特点包括质膜磷脂排列方向改变、细胞内离子环境自稳改变、蛋白酶和核酸内切酶激活分别致细胞蛋白质裂解和DNA断裂、细胞内产生神经酰胺（ceˉramide）、线粒体功能障碍、谷胱甘肽耗竭以及转谷氨酰胺酶（transglutaminase）激活［1，4］。参与引发细胞凋亡的蛋白酶有多种，包括半胱氨酰天门冬氨酸特异蛋白酶（CASPSE，cysteingylaspartasespecificproˉtease）家族成员和组织蛋白酶等［5］。特别是caspase家族成员与细胞凋亡关系最为密切，至少有14种哺乳动物caspase已获克隆，但仅对caspase-3和caspase-8的功能有所了解。caspase-8在细胞凋亡中发挥启动作用;caspase-3在细胞凋亡中发挥效应作用［6］。由于各caspase可相互激活，所以caspase蛋白酶级联反应（caspaseproteasecascade）是导致细胞凋亡结构改变的主要环节。线粒体功能障碍在细胞凋亡发生机制中起关键作用［6］，能促进线粒体功能障碍的因素很多，包括各种有害刺激和信号传递过程，其中某些配体/受体相互作用最为重要。配体与靶细胞表面受体相结合，就导致复杂的多蛋白复合物（multiproteinplex）形成，即将凋亡信号传递给效应蛋白酶FLICE（Fas-associatedproˉteinlikeinterleukin-1βconvertingenzyme，Fas相关性蛋白样白细胞介素1β转化酶），FLICE与caspase-8相互反应可激活caspase-8，caspase-8激活后就通过某些不明的机制引发线粒体功能障碍。线粒体功能障碍导致细胞色素C释放，细胞色素C与凋亡激活因子-2（apoptosisactivatingfactor-2，Apaf-2）相结合，使caspase-3激活［7］。caspase-3又激活DNA断裂因子（DNAfragmentationfactor），导致静息状态的核酸内切酶激活，最终引起DNA断裂。从线粒体功能障碍到DNA断裂，是细胞凋亡生化途径的共同途径。在肝细胞凋亡发生机制中，以Fas配体/Fas受体引发凋亡信号级联反应研究得最多。此外，转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体（TGF-β1R）［8］、肿瘤坏死因子（TNF）及其受体（TNFR）［9］在肝细胞凋亡发生机制中均起重要作用。细胞毒性T细胞（CTL）释放的穿孔素（perforin）和颗粒酶B也是介导肝细胞凋亡的重要因素。DNA断裂分两型。首先发生的DNA断裂片段较大，为300kbp或500kbp的倍数，此型DNA断裂在细胞凋亡中发生频繁，但并非都有。继之DNA在核小体（nucleosome）间断裂成许多100～200bp的小片断，或呈100～200bp的倍数出现，称为DNA断裂梯状模式（ladderpattern）［10］。两型DNA断裂是由不同的核酸内切酶切割而形成的。也有人认为这两型DNA断裂可能单纯代表一种动力学现象，即必须先有足够大的DNA片段形成，方可发生小分子DNA断裂，用凝胶电泳技术、原位细胞化学技术或原位组织化学技术检测DNA断裂，是确定细胞凋亡的常用方法。细胞凋亡的主要调节因子是B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（B-celllymphoma/leukemia-2protein，Bcl-2）家族的成员［11，12］。Bcl-2，通过抑制凋亡以延长细胞存活时间，是哺乳类动物细胞凋亡的一种强大抑制因子。与Bcl-2关系密切的同源物是Bcl-x，有两个RNA拼接变