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miR-155通过抑制SMAD5调控成骨细胞骨分化 邱诗阳1，付希佳2，白晓雪3，杨 军1 (1中国医科大学附属盛京医院南湖院区创伤骨科，辽宁省沈阳市 110004；2朝阳市中心医院神经内科，辽宁省朝阳市 122000；3吉林大学第一医院干部病房，吉林省长春市 130021) 引用本文：邱诗阳，付希佳，白晓雪，杨军. miR-155通过抑制SMAD5调控成骨细胞骨分化[J].中国组织工程研究，2017，21():538-544. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.04.008 ORCID: 0000-0003-2618-0786(杨军) 文章快速阅读： 文题释义： 骨形态发生蛋白：能够诱导动物或人体间充质细胞分化为骨、软骨、韧带、肌腱和神经组织。与胚胎骨骼形成有关的蛋白质，在骨形成的数个阶段均起作用，由形态发生的早期阶段开始，并延续至出生后。在中枢神经的发生中也起着关键作用。 靶基因：即目的基因，在分子遗传中，它不仅要具有识别结合功能，还应该具有与位点结合后能表达你所需要的相应功能的作用。 摘要 背景：诱导成骨细胞分化为骨细胞是组织工程中的研究热点，但分化过程中的调节机制尚未完全阐明。MicroRNA是一类内源性小RNA分子，可通过与靶基因mRNA的3’端非编码区结合在转录后水平调控基因表达。研究证实，microRNA在骨细胞分化过程中起到重要的调节作用。 目的：研究miR-155对成骨细胞骨分化的调节作用以及作用机制。 方法：取小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞，加入小鼠骨形态发生蛋白2(200 μg/L)进行成骨诱导，并与诱导第1，3，7，14天，通过qRT-PCR检测miR-155 mRNA的表达。并将MC3T3-E1细胞分为对照组、诱导组、miR-155组和miR-155 inhibitor组，对照组用α-MEM培养基培养，诱导组在培养基中加入骨形态发生蛋白2进行成骨诱导，miR-155组和miR-155 inhibitor组在成骨诱导之前分别转染miR-155和miR-155拮抗剂，诱导2周。 ①茜素红染色及碱性磷酸酶活性测定：经骨形态发生蛋白2诱导后，miR-155 mRNA表达呈时间依赖性下调。诱导组MC3T3-E1细胞茜素红着色强度、碱性磷酸酶活性和mRNA表达也显著高于对照组(P 0.01)；miR-155组茜素红着色强度明显低于诱导组，碱性磷酸酶活性和mRNA也明显低于对照组(P 0.01)，而miR-155 inhibitor组则呈反向变化(P 0.05)；②荧光报告基因检测和western blot检测：miR-155可与SMAD5 mRNA 3’非编码区结合，并明显降低MC3T3-E1细胞中SMAD5蛋白和mRNA表达(P 0.01)。结果表明，miR-155可通过负性调控SMAD5表达，抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。 miR-155 regulates the osteogenic differentiation of osteoblasts by inhibiting SMAD5 expression Qiu Shi-yang1, Fu Xi-jia2, Bai Xiao-xue3, Yang Jun1 (1Department of Orthopedics and Traumatology, Shengjing Hospital of China Medical University, Shenyang 110004, Liaoning Province, China; 2Department of Neurology, Chaoyang Central Hospital, Chaoyang 122000, Liaoning Province, China; 3Department of Cadre’s Ward, the First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China) Abstract BACKGROUND: Induction of osteoblasts differentiating into osteocytes is a hot spot in tissue engineering; however, the regulatory mechanism underlying differentiation has not been fully elucidated. MicroRNA, as an endogenous small RNA molecule, can regulate post-tran