yong_基因工程基本操作程序概要1.ppt

①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 目的基因与运载体结合所需的条件有 ①同一种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸 ⑦ATP A．①②③④⑤⑥⑦ B．①②④⑤⑥⑦ C．①②③④⑤ D．①②④⑤⑦ （多选）一个基因表达载体的构建应包括 A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因 D 下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选 D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别 三、将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法：双、裸 基因枪法：单 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 整合到染色体上 转移至受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 整合 植物细胞染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 常用于单子叶植物的转化方法 （2）基因枪法——微弹轰击法 特点：成本高 适用于单子叶植物 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 与RNA聚合酶结合位点 结构基因 外显子 内含子 转录、加工修饰 mRNA 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 内含子： 外显子： 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是_____ 的，边_________边_________ 编码区是间隔的、 _____的，先_____后_____ 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 转录 翻译 转录 翻译 1．下列关于基因结构的认识中，正确的是 （ ） A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 2．（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是 （ ） A．编码区都有能编码蛋白质的序列 B．编码区都是连续的 C．非编码区都能调控遗传信息的表达 D．非编码区都有RNA聚合酶结合的位点 D ACD 1、从基因文库中获取目的基因 （1）.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。 （1）基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 用适当 限制酶切割 许 多 DNA片段 与载体连接 导入受体菌群 该生物 基因组文库 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） （2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 mRNA （某一发育时期） 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA (cDNA) 与载体连接 导入受体菌群 该