药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用论文.docVIP

　　药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用论文 关 键 字: 多糖 双歧杆菌 促增殖 摘 要: 目的：探索藻类中药中多糖对双歧杆菌的促增殖作用。方法：在恒温条件下，以时间和多糖浓度为影响因素，了解不同藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用，对其量效关系进行分析结果：实验结果表明在37℃多糖浓度在0到2％范围内，双歧杆菌数随多糖浓度的增加而上升；多糖浓度继续升高，则反而下降。结论：海藻中多糖在一定浓度下能很好地促双歧杆菌生长。 Abstract: Object: To research the effect of polysaccharide of algae edicine acting on proliferation of bifidobacteria. Method: Keep on the temperature. Carry out the experiment e factor and concentration factor.Analysis the connection of estimate and effect. Result: The amount of bifidobacteria appears an ascending trend fusiforme (Harv.) Setch：藻体黄褐色，肥厚多汁，高15~40cm。固着器为是北太平洋西部特有的暖温带植物，属褐藻类马尾藻科。是一种营养丰富的藻类，干品每百克含蛋白质10.6克，糖类47克，灰分18.3克，脂肪1.3克，钙1400毫克，磷100毫克，钾4400毫克，铁5.5毫克，胡萝卜素550毫克；还有多种维生素和微量元素。 海带Laminaria japonica Aresch属褐藻门海带科，是一种大型食用海藻，有丰富的营养。每100克海带中含有蛋白质8克， 甘露醇14克，钾4.36克、铁150毫克，超过菠菜，油菜几倍至几十倍。更为突出的是，海带富含微量元素碘，每100克海带含碘高达24000微克。 多糖提取工艺 取海藻置于托盘放入恒温培养箱低温烘干，用电磨机打碎，使之成粉末状。用天平称取海藻粉50g放入500ml锥形瓶中加蒸馏水250ml放置于95℃水浴锅中，并隔10min晃一次，4h后取出，冷却到室温。离心取上清液，在离心管中加无水乙醇，得到沉淀再次离心，取沉淀(多糖)，用蒸馏水冲洗数遍，于37度烘箱中烘干所得沉淀为粗多糖。 2．培养基：MRS肉汤培养基： 蛋白胨10g、肉浸膏10 g、酵母膏5g、葡萄糖20 g、吐温80 1ml、K2HPO42g、醋酸钠5g、柠檬酸铵2g、MgSO4·7H2O 0.2g、MnSO4·4H2O 0.05g、蒸馏水1000ml。pH值6.4。 20％肉汤：蛋白胨1g、肉浸膏1g、蒸馏水1000ml。pH值6.4。 3．菌株：取自丽珠肠乐胶囊（由双歧杆菌制成的干粉胶囊），珠海丽珠医药集团股份有限公司，批 4．实验仪器 Nbox Jar 7.0L，法国生物梅里埃公司 S.C.303型隔水式电热恒温培养与试剂 厌氧培养盒GE箱，嘉兴新睦电器厂 除氧剂，法国生物梅里埃公司 LD4－2高速离心机，北京医用离心机厂 754型紫外可见分光光度计，上海第三分析仪器厂 TG328B电光分析天平 THZ－82型恒温振荡器，江苏太仓医疗器械厂 （二）实验方法与结果 1．菌液与溶液制备 菌液制备：无菌条件下，从丽珠肠乐胶囊中取出内容物，溶解于10ml浓度为0.9％的无菌生理盐水，搅拌均匀后用接种针蘸取少许溶液，涂布于无菌MRS固体培养基平板上，37℃下，于厌氧培养盒培养3d。再从平板中挑取色泽淡黄、圆滑突起的单菌落，接入40ml MRS液体培养基，37℃厌氧培养2d。取少量培养液，测得菌液浓度为2.7×108个/ml。使用前稀释至1.0×108个/ml备用。 多糖溶液制备：利用蒽酮硫酸法测得醇沉淀中多糖含量：羊栖菜：25.2％；海带：24.7％；将2种粗多糖分别配制成一定浓度的溶液，并按实验需要稀释为8.0％、4.0％、2.0％、1.0％、0.5％的水溶液，每管各10ml，分别加入浓度为20％的肉汤培养基10ml混匀，同时制备作为对照的10％肉汤，115℃湿热灭菌15min后备用。 附. 蒽酮硫酸法测定多糖含量 原理：糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生有色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。 标准曲线的制作：分别取0.1g/L的葡聚糖溶液0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80ml，用蒸馏水补到1.00ml；分别加入4.00ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加