壳聚糖季铵盐基杂化支架的制备及其作为rhBMP-2载体的研究.pdfVIP

胡园园等 ：壳聚糖季铵盐基杂化支架 的制备及其作为 rhBMP一2载体的研究 文章编号 ：1001—973l(2014)14—14001—07 壳聚糖季铵盐基杂化支架的制备及其作为 rhBMP一2载体的研究 胡 园园，王 靖 ，刘 昌胜 (华东理工大学 教育部医用生物材料工程研究中心 ，上海 200237) 摘 要： 采用环氧衍生物开环法制备壳聚糖季铵盐， 2 实 验 通过其与甘 油磷 酸钠 的分子 间作用力交联成凝胶 ，冻 干后得 多孔 支架，用于装载骨形 态发生蛋 白一2应用于 2．1 壳聚糖季铵盐 (HTCC)的制备及表征 骨修复领域；同时引入 J3一TCP作为物理交联点 ，在提 2．1．1 试剂 高支架力学强度的 同时，更好地调控 支架的溶胀行 为， 壳聚糖 (CS，Mw一5．05×10，上海卡博工贸有限 延长 rhBMP一2的释放时间，并且在异位诱导成骨的动 公司)，2，3-环氧丙基三 甲基氯化铵 (GTMAC，山东东 物 实验 中取得 良好效果。 营国丰精细化工有限责任公司)，p甘油磷酸二钠盐 ， 关键词 ： 骨修复；壳聚糖 ；骨形态发生蛋 白；磷酸钙 五水 (8一GP，国药集 团化学试剂有限公司)，BCA 蛋 白 中图分类号 ： R318．08 文献标识码 ：A 浓度测定试剂盒 (碧 云天生物技术研究所 )，重组人骨 DOI：10．3969／i．issn．1001—9731．2014．14．0O1 形态蛋白(rhBMP一2，上海瑞邦生物材料有限公司)，』3一 TCP粉末由本实验室采用液相沉淀法 自行制备 。 1 引 言 2．1．2 HTCC的制备及表征 骨组织损伤是常见疾病 ，为满足临床大量骨修 复 称取 2g壳聚糖置于烧杯 中，倒人 99mI去离子 材料的需求 ，安全有效的人工骨成为研究热点 。特别 水 ，磁力搅拌下滴加 1mL冰醋酸，待壳聚糖完全溶 是将骨修复材料与生长 因子结合，可 以得到兼具骨传 解 ，用 1mol／LNaOH溶液沉淀，调节 pH值至 10，静 导性和成骨活性的活性修复材料。壳聚糖因其来源广 置 4h后 ，抽滤，去离子水洗至 中性 ，用纱布将处理后 泛以及 良好的生物相容性 ，已被广泛应用于骨修 复和 的壳聚糖滤干备用 。 药物载体研究口]。Chenite等首次报道 了利用壳聚 参照文献E7—9]称取一定量 的2，3一环氧丙基三 甲 糖 ／J3一甘油磷酸钠间的静电力 、分子间力以及氢键作用 基氯化铵 ，置于烧杯 中，加入异丙醇 ，搅拌至溶解完全 力制备了一种壳聚糖水凝胶支架 ]，该体系制备简 后 ，倒入滴定管备用 。将经过预处理 的壳聚糖分散在 单 ，无需~bJJu交联剂，可用于包裹细胞 、装载和输送药 8OmL异丙醇中，油浴加热至 8O℃。搅拌下缓慢滴加 物及生长因子 ，因而受到关注。但 由于壳聚糖水溶性 2，3一环氧丙基三 甲基氯化铵溶液 ，当溶液加至一半时 差 ，需溶解于稀酸中，不仅对组织有一定 的刺激性 ，而 停止滴加 ，直至反应 3．5h后开始滴加剩余溶液 ，继续 且酸的存在会削弱壳聚糖与甘油磷酸钠 问的静 电作用 反应 3．5h后 ，停止反应 ，静置待反应装置冷却至室 力而导致难 以形成凝胶 ；另外 ，壳聚糖与甘油磷酸钠问 温 ，抽滤 ，得到淡黄色沉淀 ，无水 乙醇洗 3遍 ，烘干备 的相互作用力弱 ，导致凝胶力学强度差 ，也使其应用受 用 。将干燥的淡黄色沉淀置于烧杯 中，加适量去离子 到限制 。 水 ，磁力搅拌 12h后 ，用砂芯漏斗进行抽滤