拉曼镊子在生物单细胞中的应用与进展.pdfVIP

第 37 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 评述与进展 第5 期 2009 年5 月 Chinese lournal of Analytical Chemistry 758 -763 应EB 拉曼镶子在生物单细胞中的应用与进展 艾敏1 ， 2 刘军贤I 黄庶识2 王桂文2 陈秀丽1 ， 2 陈植成1 ， 2 姚辉璐-2 1(广西师范大学物理与电子工程学院，桂林 541ω4) l( 广西科学院生物物理实验室，南宁 53ω03) 摘 要拉曼银子(Raman tweezers) 是将激光光慑(Optical tweezers) 与显微拉曼光谱(Raman 8pectro配opy) 结 合的光学技术，可以在接近自然状态下研究单个生物细胞或细胞器。因其有元直接接触、元损伤、快速识别、 实时追踪等特点，广泛用于生物细胞的识别、探测、筛选等。研究显示，拉曼银子在微观生物研究的应用中，可 提高技曼光谱的信噪比，也能实现生化动力学过程的实时跟踪，从而能深刻了解细胞内生物大分子的活动规 律。本文着重介绍了拉曼慑子的起源、原理及其在单细胞中的应用以及展望。 关键词 拉曼光谱，光镖，单细胞，拉曼银子，评述 1 ~I = F司 拉曼光谱(Raman spectroscopy) 是一种产生于分子或晶格振动能级的光子非弹性散射光谱，广泛应 用于物理、化学、生物等学科以及交叉边缘学科中[1) 。共焦显微拉曼光谱是共焦光学显微镜技术结合 3 拉曼光谱，可探测细胞内飞升级( 10 -18 m ) 体积的化学特征。但是，这项技术适合分析固定不动的样 品。对于大部分 μm 级的物体来说，尤其是活细胞(例如血细胞、酵母细胞) ，作为活体组织的一部分， 需要处于液体环境中，才能保持正常功能，这是极其重要的。但是，由于布朗运动、游动性造成的细胞运 动，使椿液中的细胞无法固定在微小的激发区内进行长时间的拉曼光谱收集，此时所获得的信息显然不 全面。如果不结合固定技术，这些都会妨碍拉曼光谱技术的直接运用。 在活细胞固定的技术上可以应用普通的化学固定，或使用微吸管。但是，化学固定，存在着未知的 化学反应的干扰，会改变活细胞的化学环境，对细胞产生不可预知的影响。而使用微吸管也存在缺陷。 当细胞体租越来越小时，细胞表面效应变得极其重要。在测量过程中，如果使用玻璃微吸管吸附细胞， 会使细胞的表面发生变化，改变了细胞的自然形态。不能控制微粒的局限使得拉曼光谱在单个活细胞 中分析能力受到了阻碍。光慑(Optical tweezers) 的出现与改进[z. ，逐渐解决了这个问题。 阜在 1984 年，Thum 等[4] 就提出利用光辐压在稳定的光阱中俘获 μm 级固体微粒，并激发俘获微粒 的拉曼光谱，实现拉曼探针技术(Raman microprobe) 。但是，由于活细胞对可见光的吸收，所引起的光 损伤对生物细胞的活性存在着影响。因此，光慑与拉曼光谱技术的结合早期主要是研究气榕脏、液滴、 气泡等非生命微小颗粒[川)0 1986 年，贝尔实验室的 Ashkín 等[8 ， 9J 改进光慑技术，能控制的物体大小范 围 5 什00 mm ，包括原子、病毒、细菌、蛋白质、细胞或其它生物分子。生命的基本过程取决于细胞内许 多不同分子与同类分子之间的协调作用。若要了解生命过程的机制，拉曼慑子必须在单分子水平对生 物分子的活动有深入细致的理解，才有可能加以干预与修饰，使之为生命科学、医学服务。但是，运用于 拉曼光谱的激光对细胞的俘获与操纵需要一定的激光波长和功率维持。激光的披长和功率是最重要的 指标，它们同时决定着样品在测量时的存活能力和最后的信噪比。受技术水平的限制，早期研究的细胞 受到着撒光的光损伤。直到 2002 年，Ajito 等[阳]结合光慑和显微拉曼光谱，首次成功地用于单个突触体 的识别。几乎与此同时，Xíe 等问·叫采用近红外785nm 波长的激光作为俘获激光，构建激光拉曼光慑子系 统(LTRS) ，明显降低了光损伤，随后，他们首次观察了单个活细胞光学俘获之后的生化动力学过程。 拉曼慑子(Raman tweezers)