第3章 毛细管电泳和毛细管电色谱.ppt

第3章 毛细管电泳和毛细管电色谱 capillary electrophoresis 3.1． 毛细管电泳和毛细管电色谱的基本理论 3.1.2． 电泳 3.1.3． 电渗流 3.1.3． 电渗流 3.1.4. 电渗流的控制 3.1.5. 分离原理 3.1.5. 分离原理 3.1.6. 柱效和分离度 3.1.6. 柱效和分离度 3.2. 毛细管电泳和电色谱仪器装置 3.2.2. 进样系统 3.2.3. 电源及其回路 3.2.4. 毛细管及其温度控制 3.2.5. 检测系统 3.2.5. 检测系统 3.3. 毛细管电泳分离模式及应用 3.3.1. 毛细管区带电泳（CZE） 3.3.1. 毛细管区带电泳（CZE） 3.3.2. 胶束电动毛细管色谱（MEKC） 3.3.2. 胶束电动毛细管色谱（MEKC） 3.3.3. 毛细管凝胶电泳（CGE） 3.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 3.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 3.3.4. 毛细管等电聚焦（CIFF） 3.3.5. 毛细管等速电泳（CITP） 3.4. 毛细管电色谱柱技术 3.4.1. 填充柱 3.4.1. 填充柱 3.4.1. 填充柱 3.4.1. 填充柱 3.4.1. 填充柱 3.4.1. 填充柱 3.4.2. 开管柱 3.4.3. 整体柱（连续床） 3.4.4. CEC应用 3.4.1.2. 填充柱制备 高压匀浆填充法 电动填充法 3.4.1.3. CEC填充固定相 在成功掌握填充柱制备技术条件下，CEC固定相是影响毛细管填充柱分离选择性、柱效、分离速度的重要因素，也是发展新型CEC分离模式的基础。 应用于HPLC的各种固定相已被应用于CEC的分离分析中，其中以十八烷基键合硅胶固定相(ODS)研究最多，由于CEC是以电驱动流动相，不存在柱压降问题，因而可以采用粒径很小的固定相，以提高柱效。 混合官能团固定相是专门针对CEC研制的新型填料，这一类固定相在硅胶表面同时键合具有反相色谱性能的烷基官能团和具有离子交换性质的磺酸官能团，在很宽的pH范围内都能保持良好的电渗流。 3.4.1.3. CEC填充固定相 3.4.1.4. 气泡问题 填充柱CEC操作中的困难是在分离过程中常常伴有气泡产生。气泡一般产生于柱塞与填料交界处或柱塞与检测窗口交界处。 控制气泡的产生，目前主要采取以下措施： 1. 加压，在两端同时施加低压，可较好解决气泡问题。 2. 制备渗透性好的塞子。 3. 利用阻尼管以消除气泡，在分流阀处接一阻尼管，当电极处有气泡产生时，气泡会经分流阀通过阻尼管排出。 4. 利用超声波使样品和流动相充分脱气。 开管柱CEC是在管壁键合或涂覆固定相，引入色谱分配机理。 优点： 无须烧制柱端塞子，少有气泡产生。 开管柱CEC无涡流扩散，能获得比填充柱CEC更高的柱效。 缺点： 开管毛细管电色谱柱相比是填充柱的1/350，柱容量低，对溶质的保留有限。 开管柱制备的关键是增大表面积，以制备相比大、柱容量高的色谱柱。主要制备方法有：涂覆聚合物固定相、化学键合固定相和溶胶-凝胶技术。 * * 毛细管电泳（capillary electrophoresis;CE）是一类以高压直流电场为驱动力，毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分离的新型液相分离分析技术。 毛细管电泳是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展，它使分析科学从微升水平得以进入纳升水平，并使单细胞分析成为可能。 毛细管电色谱（capillary electrochromatography; CEC）是毛细管电泳与液相色谱相结合形成的一种高效、快速微分离分析技术。 3.1.1． 双电层和Zeta电势 在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度或速率向其所带电荷相反电场方向迁移的现象叫作电泳。阴离子向正极方向迁移，阳离子向负极方向迁移，中性化合物不带电荷，不发生电泳运动。 在充满自由溶液开口管中球形粒子的电泳速率公式为： 电泳淌度（μep)定义为单位场强下离子的平均电泳速率，即 电渗是毛细管中整体溶剂或介质在轴向直流电场作用下发生的定向迁移或流动。 电渗的产生和双电层有关，当在毛细管两端施加高压电场时，双电层中溶剂化的阳离子向阴极运动，通过碰撞作用带动溶剂分子一起向阴极移动，形成电渗流(EOF)。 度量电渗流大小是单位电场下的电渗流速率即电渗淌度(?eo)或电渗速率(ueo)，可用Smoluchowski