第7章 原核细胞基因工程 基因工程原理与技术 刘志国 课件.ppt

第七章 原核细胞基因工程;基因表达的基本概念与原理 ;有些基因在几乎所有细胞中持续地表达，而有些基因则随细胞种类的不同及环境条件的变化而开启和关闭，前者被称为看家基因（housekeeping gene），其表达属于基础或组成型表达；而后者属诱导型表达（受诱导剂或阻遏剂）调控。 ;目的基因表达要素;本章内容;第一节 原核表达体系;一、宿主菌;各种原核宿主菌的特性;各种原核宿主菌的特性;各种原核宿主菌的特性;各种原核宿主菌的特性;二、原核表达载体;启动序列是RNA聚合酶识别、结合并启动转录的特异DNA序列，是基因表达的基本调控点之一。原核基因的启动序列中，在转录起始点上游-10至-35区域通常存在一些相似序列，称为共有序列或一致性序列（consensus sequence）。;启动子;启动子;启动子;启动子;启动子;启动子;启动子;核糖体结合位点;核糖体结合位点;核糖体结合位点;核糖体结合位点;核糖体结合位点;核糖体结合位点;终止子;终止子;选择标记基因;复制子;表7-1 原核表达载体上的常用复制子;三、密码子偏好;三、密码子偏好;三、密码子偏好;三、密码子偏好;四、质粒拷贝数;四、质粒拷贝数;第二节 原核表达策略;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;包涵体型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;分泌型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;融合型异源蛋白的表达;寡聚型异源蛋白的表达;寡聚型异源蛋白的表达;寡聚型异源蛋白的表达;寡聚型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;整合型异源蛋白的表达;第三节 基因工程菌的大规模培养;基因工程菌的大规模培养过程;菌种;一、基因工程菌发酵的特点;二、基因工程菌的深层培养方式;1. 分批培养;2. 补料分批培养;3. 连续培养;4. 透析培养;5. 固定化培养;三、相关发酵的反应器;第四节 原核表达产物的分离纯化;传统发酵产品和基因工程产品提取精制的差异;一、分离纯化的目标与策略;分离纯化策略;二、分离纯化的一般过程;三、包涵体的溶解和重组蛋白的复性;四、分泌蛋白的浓缩;第五节 基因工程菌不稳定性及其对策;一、基因工程菌遗传不稳定性产生的原因;一、基因工程菌遗传不稳定性产生的原因;基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制;二、改善基因工程菌不稳定性的方法;二、改善基因工程菌不稳定性的方法;二、改善基因工程菌不稳定性的方法;第六节 原核表达应用举例;胰岛素的结构及其生物合成;人胰岛素的生产方法;人胰岛素的生产方法;人胰岛素的生产方法;人胰岛素的生产方法;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构??;重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建