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eBioscience小鼠调节性T细胞(Treg)检测试剂盒 产品目录号： 88-8111 组分：150 mM NaCl, 0.09% NaN3的pH7.2的磷酸盐缓冲液 储存温度：4 ℃ 克隆号： FJK-16s 同型对照：Rat?IgG2a 产品的可用信息 Cat.No. 激发（nm） 发射（nm） 用途 88-8111 小鼠调节性T细胞(Treg)检测试剂盒（PE Foxp3 FJK-16s?, FITC CD4, APC CD25） N/A N/A 流式细胞仪 流式细胞术产品说明： 检测用量：为了便于流式细胞仪多色分析，eBioscience实验使用量从20 ul减少到5 ul。 请核对管上的推荐使用量。 荧光染料替代品：实验中eBioscience将?Pacific?Blue??和?APC-Alexa?Fluor??750荧光染料联用分别替换为?eFluor??450?和APC-eFluor??780荧光染料联用。 注意： 同型对照anti-CD4?(rat?IgG2a,?cat.?11-4321)?和anti-CD25?(rat?IgG1,?cat.?17-4301) 组分： FITC?anti-mouse?CD4?(RM4-5):?50?μg黑暗中4℃存储 APC?anti-mouse?CD25?(PC61.5):?50?μg. 黑暗中4℃存储 PE?anti-mouse/rat?Foxp3?(FJK-16s):?25?μg黑暗中4℃存储 PE?Rat?IgG2a?isotype?control:?50?μg黑暗中存储4℃ 亲和素纯化?anti-mouse?CD16/32?(Fc?受体阻断剂): 50?μg 流式染色液eBioscience?Flow?Cytometry?Staining?Buffer:?200?ml? 固定剂和破膜剂eBioscience?Fixation/Permeabilization?Concentrate:： 30 ml，4℃存储。避免剧烈震荡。4 X 存储溶液用前需要稀释。将其中的Fixation/Permeabilization Concentrate和Fixation/Permeabilization Diluent以1：3的比例混合。开封4个月内用完。警告：这个溶液包含多聚甲醛，它是致癌物。避免接触到眼睛，皮肤和黏膜。注意穿上保护衣和手套。 固定剂和破膜剂稀释液eBioscience?Fixation/Permeabilization?Diluent：100 ml，4℃存储。固定剂和破膜剂稀释液与固定剂和破膜剂配合使用。 破膜缓冲液eBioscience?Permeabilization?Buffer?（10 X）：100 ml，4℃存储。用去离子水稀释成1 X，4℃存储。警告：避免吞食或直接接触，注意穿上保护衣和手套。注：10 X破膜缓冲液会出现自然沉降物，但并没有任何影响。如果需要澄清的溶液，配置1 X破膜缓冲液后进行过滤。 应用说明： 仅供科研使用，不能运用于诊断或治疗。 实验操作步骤 在每个流式上样管中加入100 μl准备好的细胞悬液，细胞数约为1x106个。按照细胞表面抗原染色方法标记表面抗原。100 μl体系中使用0.125 μg CD4，0.06 μgCD25抗体。最好根据这些试剂详细的说明书操作。4 ℃孵育30 分钟。孵育表面抗体之前加入Fc受体阻断剂。 用预冷流式染色缓冲溶液洗涤细胞（离心并转移）旋涡震荡重悬细胞后加入1ml的固定/破膜工作液（Fixation/Permeabilization），并再次旋涡混匀。避光4℃孵育30分钟到18小时（孵育30分钟到18小时，结果一样）加入2ml 破膜液（Permeabilization Buffer）离心洗涤细胞并弃去上清液。重复第6步操作洗涤细胞。（可选）加入含0.5 μg Fc受体阻断剂的破膜液，保证100 μl体系4 ℃孵育15分钟。 封闭液无需洗去，体系加入0.5 μg?anti-mouse/rat?Foxp3抗体和同型对照（用Permeabilization Buffer工作液进行稀释），避光4℃孵育至少30分钟。建议进行预实验摸索出抗体的最适浓度。加入2ml破膜工作液离心洗涤细胞并弃去上清液。重复上一步洗涤细胞。用适量体积的Flow Cytometry Staining Buffer重悬细胞，并上机检测并分析。注：由于染色过程中使用了细胞固定和破膜，对比起活细胞在形态上会有一定变化，因此FSC/SSC图中圈门时需要做一定调整。