浅谈第一题学习专题9《选修模块教学——生物技术实践》讲述.docVIP

第一题：学习专题9 《选修模块教学——生物技术实践》 请确定一个本模块可实施的实验课题，完成教学设计。 ? 实验十一DNA的粗提取与鉴定教学设计 3.不需要破除细胞壁 选用鸡血细胞液还有一个好处——鸡血比较容易获得，那么我们为什么不用哺乳动物的红细胞呢？ 哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核 问题：鸡血细胞液可以直接用吗？ 柠檬酸钠抗凝 思考、 回答 使学生明白为什么要选用鸡血细胞液为材料 2.1破碎细胞，释放DNA 问题：鸡血细胞虽然没有细胞壁，但是依然有细胞膜，以你所学的知识，有什么比较简便但是可行的方法可以破碎细胞膜？ 生物会考的实验是质壁分离，你还记得方法和原理吗? 所以为了破碎鸡血细胞，我们可以反其道而行之，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，使其吸水胀破，达到破碎细胞的目的。 加入蒸馏水的同时，要用玻璃棒进行搅拌 方法：单向，快速，5min，速度力量不要过于猛烈，防治打碎DNA。 目的：加速血细胞破裂 问题：这是我们获得的将是含有细胞膜、细胞器的碎片液体，我们如何初步获得含有DNA的液体? 过滤 可以用滤纸过滤吗？ 不可以，孔径太小。需要用到3-4层纱布，除去一些颗粒较大的杂质，获得含有DNA的滤液。 这时DNA在哪里？ 滤液里。 板书：破碎细胞，释放DNA 对于动物细胞我们可以利用细胞的渗透压来破碎细胞，但是很多情况下，人们不得不面对植物材料，那么我们是不是还可以通过加入一定量的蒸馏水来涨破细胞呢？ 植物细胞有细胞壁的支持和保护，因此吸水不会涨破。 我们通常通过研磨来破碎植物细胞的细胞壁。在研磨的过程中，一般还会加入洗涤剂和食盐。 洗涤剂的作用： 洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团，可以与细胞膜中的蛋白质结合，使之溶解，进而瓦解细胞膜。 食盐的作用： 食盐中主要含有NaCl，有利于DNA的溶解。 思考、 回答 使学生知道破碎动物细胞的方法和原理 2.2去除滤液中的杂质 问题：这时的滤液可能含有哪些细胞成分？ 主要有RNA、核蛋白、多糖等 那么我们应该如何将DNA单独分离出来？ 板书：去除滤液中的杂质 提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 背景介绍;DNA的溶解性 图片：DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线 问题： 在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 用高浓度的盐溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 第一步： 在浓度较高的NaCl溶液溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。 方法：在溶液中加入两倍体积的浓度为2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使DNA充分溶解。 板书：（1）溶解细胞核内的DNA 第二步： 加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。 方法：缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为0.14mol/L，直到溶液中丝状物不再增加时为止。 板书：（2）用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上，呈蓝绿色反应。只用一种即可，不混合用。前者要加热，后者不加热 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺变蓝。 因此，我们可以设计实验，通过破碎细胞，释放DNA→溶解细胞核内的DNA→DNA的析出→DNA的初步纯化→DNA的鉴定 完成DNA的粗提取与鉴定 视频：DNA的粗提取与鉴定 小结 小结 板书设计 DNA的粗提取与鉴定 1.破碎细胞，释放DNA 2.去除滤液中的杂质 （1）溶解细胞核内的DNA （2）DNA