水产微生物—微生物的培养和观察.docVIP

第二章 微生物的培养和观察 微生物由于个体微小，在绝大多数情况下都是利用群体来研究其属性，微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存。在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物。由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。而研究微生物生长、繁殖所需的营养物质，提供合适的培养基并创造相应的理化条件是进行微生物培养的物质基础。 第一节 微生物的营养要求 一、营养物质及其生理功能 微生物需要从外界获得营养物质，而这些营养物质主要以有机和无机化合物的形式为微生物所利用，也有小部分以分子态的气体形式提供。根据营养物质在机体中生理功能的不同，可将它们分为碳源、氮源、无机盐、生长因子和水五大类。 1、碳源 碳源是在微生物生长过程中为微生物提供碳素来源的物质。碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质(如碳水化合物、脂、蛋白质等)和代谢产物，碳可占一般细菌细胞干重的一半。同时，绝大部分碳源物质在细胞内生化反应过程中还能为机体提供维持生命活动所需的能源，因此碳源物质通常也是能源物质。但是有些以CO2作为唯一或主要碳源的微生物生长所需的能源则并非来自碳源物质。 2、氮源 氮源物质为微生物提供氮素来源，这类物质主要用来合成细胞中的含氮物质，一般不作为能源，只有少数自养微生物能利用铵盐、硝酸盐同时作为氮源与能源。在碳源物质缺乏的情况下，某些厌氧微生物在厌氧条件下可以利用某些氨基酸作为能源物质。能够被微生物利用的氮源物质包括蛋白质及其不同程度的降解产物（胨、肽、氨基酸等）、铵盐、硝酸盐、分子氮、嘌呤、嘧啶、脲、胺、酰胺、氰化物等。 3、无机盐 无机盐是微生物生长必不可少的一类营养物质，它们在机体中的生理功能主要是作为酶活性中心的组成部分、维持生物大分子和细胞结构的稳定性、调节并维持细胞的渗透压平衡、控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质等。 微生物生长所需的无机盐一般有磷酸盐、硫酸盐、氯化物以及含有钠、钾、钙、镁、铁等金属元素的化合物。 在微生物的生长过程中还需要一些微量元素，微量元素是指那些在微生物生长过程中起重要作用，而机体对这些元素的需要量极其微小的元素，通常需要量在10-6～10-8mol/L（培养基中含量）。微量元素一般参与酶的组成或使酶活化。 4、生长因子 生长因子通常指那些微生物生长所必需且需要量很小，而且微生物自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。根据生长因子的化学结构和它们在机体中的生理功能的不同，可将生长因子分为维生素、氨基酸与嘌呤及嘧啶三大类。 5、水 水是微生物生长所必不可少的。微生物生长的环境中水的有效性常以水活度值(water activity，αw)表示，水活度值是指在一定的温度和压力条件下，溶液的蒸汽压力与同样条件下纯水蒸汽压力之比，即：αw=Pw/POw，式中Pw代表溶液蒸汽压力， POw代表纯水蒸汽压力。纯水αw为1.00，溶液中溶质越多，αw越小。微生物一般在αw为0.60～0.99的条件下生长，对某种微生物而言，αw过低时，微生物生长的迟缓期延长，比生长速率和总生长量减少。微生物不同，其生长的最适αw不同(表2-1)。一般而言，细菌生长最适αw较酵母菌和霉菌高，而嗜盐微生物生长最适αw则较低。 表2-1 几类微生物生长最适αw 微生物 一般细菌 酵母菌 霉菌 嗜盐细菌 嗜盐真菌 嗜高渗酵母 αw 0．91 0．88 0．80 0．76 0．65 0．60 二、微生物的营养类型 根据碳源、能源及电子供体性质的不同， 可将绝大部分微生物分为四种类型(表2-2)。 表2-2 微生物的营养类型 营养类型 电子供体 碳源 能源 举例 光能无机自养型 H2、H2S、S或H2O CO2 光能 着色细菌、蓝细菌、藻类 光能有机异养型 有机物 有机物 光能 红螺细菌 化能无机自养型 H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2- CO2(无机物氧化) 化学能 氢细菌、硫杆菌、亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、硝化杆菌属(Nitrobacter)、甲烷杆菌属(Methanobacterium)、醋杆菌属(Acetobacter) 化能有机异养型 有机物 有机物 化学（有机物氧化) 能 假单胞菌属、芽孢杆菌属、乳酸菌属、真菌、原生动物 培养基 培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。无论是以微生物为材料的研究，还是利用微生物生产生物制品，都必须进行培养基的配制，它是微生物学研究和微生物发酵工业的基础。 一、 配制培养基的原则