利用放线菌酮提高黄素单氧化酶FMOGS-OX1 亚细胞 - 生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 5 :83-88 利用放线菌酮提高黄素单氧化酶 FMOGS-OX1 亚细胞 定位的准确性 夏洪宇  孔稳稳  徐蕊  苍炜  李晶 （东北农业大学，哈尔滨 150030） 摘 要 ： 研究蛋白质亚细胞定位的常规方法是构建由35S 启动子驱动目的基因与绿色荧光蛋白基因（ ）融合的表达载体， GFP 在细胞中瞬时或稳定表达来确定该蛋白质在细胞中的定位。35S 启动子的优势是能够获得较强的GFP 信号，但同时也可能因为蛋 白质合成量过大，导致部分蛋白滞留在运输途径中或出现在其真实定位以外的区域。为了解决这一问题，以模式植物拟南芥中黄 素单氧化酶FMOGS-OX1 为例，利用蛋白质抑制剂放线菌酮处理过量表达FMOGS-OX1-GFP 融合蛋白的烟草叶片。结果表明 ：未经放线 菌酮处理的烟草叶片表皮细胞，细胞质和内质网中均呈现了较强的荧光信号，放线菌酮处理后，内质网上的信号消失，而细胞质 则呈现出稳定的信号，因此判断FMOGS-OX1 合成后可能是经过内质网运输到细胞质中的。上述结果证明适当的放线菌酮处理，能够 避免强启动子驱动报告基因造成的蛋白质合成过量的问题，可有效地提高蛋白质亚细胞定位的准确性。 关键词 ： GFP ；FMOGS-OX1 ；亚细胞定位 ；放线菌酮 ；内质网 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017.05.012 Improving the Accuracy of FMOGS-OX1 Subcellular Localization Using Cycloheximide XIA Hong-yu KONG Wen-wen XU Rui CANG Wei LI Jing （Northeast Agricultural University ，Harbin 150030 ） Abstract: The conventional method of protein subcellular localization is to build the vector with the expression of fused target gene and green fluorescent protein gene（GFP ）drivenby 35S promoter. The subcellular localization of the target protein is then determined in the cells transiently expressing the fusion gene. Utilization of 35S promoter will lead to overexpression of the fusion gene and obtaining strong GFP signal. But sometimes the excessively synthesized protein will possibly remain in the transportation organelle or