西岛内港沉积物放线菌分离及其抗菌活性探究.docVIP

西岛内港沉积物放线菌分离及其抗菌活性探究摘要从西岛内港采集沉积物，采用自然风干后，湿热60 ℃、处理10 min的预处理方法，稀释涂布于GA培养基上，成功地分离得到44株海洋源的放线菌。经初步形态显微观察判断，其中18株为链霉菌，26株为非链霉菌，链霉菌中以小单孢菌为主。18株链霉菌抗香蕉枯萎病测试结果显示，菌株090314表现出一定的抗香蕉枯萎病菌（4号生理小种，FOC 4）活性 关键词沉积物；放线菌；分离；抗菌活性；西岛内港 中图分类号 Q939.132 文献标识码A文章编号 1007-5739（2011）11-0017-02 StudyonSelectiveIsolationandAnti-FOC 4ActivityofActinobacteriafromSedimentofXidaoWharf XU Xiao-xiong 1，2FENG Hui-min 1CHEN Yong-gan 1MA Hong-mei 1 （1 Qiongzhou University，Sanya Hainan 572022； 2 Hainan Key Laboratory for Herpetological Research（preparation）） AbstractAfter pretreatments of steam heat（60 ℃，10 min），the sediment suspensions collected from the wharf of Xidao island were transferred and spread onto the GA media. 44 actinobacteria including 18 Streptomyces and 26 non-Streptomyces-like were isolated according to their morphology on agar plates and under microscope. Strain 090413 revealed antagonistic effect of against Fusarium oxysporum f.sp.cubense（race 4，FOC 4）. Key wordssediment；actinobacteria；Isolation；anti-FOC 4 activity；Xidao wharf 放线菌广泛分布于人体、土壤、污水、海洋及矿井等环境中，是一类重要的药用微生物资源[1]。海洋生物的多样性、复杂性和特殊性使源于其中的海洋天然产物也具有多样性、复杂性和特殊性，为寻找海洋生物活性物质提供了丰富的物质来源[2]。20世纪90年代末，海洋放线菌由于自身特殊的生存环境，具有复杂独特的代谢途径，产生了诸多结构新颖、生物活性显著的次级代谢产物，这些活性代谢产物为新抗生素的发现提供了丰富的先导化合物，有些已经进入临床前研究。2005―2006年，Fenical科研小组从海洋放线菌Salinispora属[3]和Marinispora属[4]的菌株中发现了一系列结构新颖的化合物，一些表现出更强的抗癌作用，一些具有新的抑菌作用靶点，它们具先导化合物或候选药物的潜力，这一切对寻找新型高效抗生素具有积极作用，同时也为抗生素的发展提供了新的方向 1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1土壤样品采集。土壤样品采集于西岛内港采集沉积物（地理坐标为北纬18°14.371′，东经109°22.433′） 1.1.2供试培养基。葡萄糖天门冬素培养基（GA）：葡萄糖2 g；天门冬素1 g、K2HPO4 0.5 g、MgSO47H2O 0.5 g、琼脂20 g、陈海水500 mL、蒸馏水500 mL，pH值7.2～7.4。均添加了终浓度为50 mg/L的放线菌酮、制霉菌素及重铬酸钾；复合维生素（每1 L培养基添加V 0.5 mg、V0.5 mg、V 0.5 mg、烟酸0.5 mg、肌醇0.5 mg、泛酸0.5 mg、生物素0.25 mg，对-氨基苯甲酸0.5 mg）。ISP 2培养基：酵母粉4 g、葡萄糖4 g、麦芽浸提粉10 g、琼脂15 g、陈海水500 mL、蒸馏水500 mL，pH值7.2～7.4 1.2试验方法 1.2.1预处理。土壤样品采集后置于阴凉处7 d，自然风干，湿热60 ℃，10 min；1 g土壤置于9 mL的1/4格林溶液10-1的稀释液中超声波处理10 min；然后用1/4格林溶液稀释得到10-2、10-3的溶液 1.2.2菌株分离纯化与保藏。采用稀释平板分离法分离菌株，取10-1、10-2、10-3稀释液各100 μL涂布到GA培养