材料表面亲水性-淡江大学机械与机电工程学系.DOC

淡江大學機械與機電工程學系畢業專題報告 專題名稱：明膠微圖案製作及細胞型態研究 專題生：徐智文 指導老師：楊龍杰 摘要 本研究群提出一種新穎戊二醛交聯明膠之微成型，利用氧氣電漿(O2 plasma)蝕刻方式來製作交聯明膠微圖案吸引細胞進行選擇性貼附生長，以便用於未來將細胞固定晶片上方進行單一細胞之觀察實驗，本新穎之明膠微圖成型方式可以確保明膠之交聯程度、避免以戊二醛選擇性交聯方式所產生的過度交聯(over-crosslink)、增加明膠微圖案與玻璃基材之間的黏著程度，線寬解析度最佳可到達2微米，而利用傳統光蝕刻微影技術(photolithography)可以成功的製作出戊二醛交聯明膠之微圖案，配合明膠材料之特性，成功的吸引癌細胞產生選擇性之貼附生長[1]。在生醫領域的細胞培養研究中，有許多影響細胞培養時細胞生長情形的環境因素，例如：材料表面親水性或疏水性、電場效應、磁場效應、材料表面電性、基材表面被覆材料種類及特性等，都可能影響到細胞培養過程選擇性貼附生長的情形。而就細胞培養過程裡利用基材表面被覆材料種類及特性來影響細胞選擇性貼附生長的技術而論，大多利用蛋白質並配合微機電技術的方式來產生一些蛋白質微圖案(micro pattern)，主要是為了利用蛋白質來達到吸引細胞產生選擇性，進而產生細胞微圖案，達到控制細胞於特定位置生長，有利於從事有關細胞學相關之研究與觀察；細胞的黏著生長(cell adhesion)及其蔓延(cell spreading)是黏著型細胞的基本生長過程，其生長過程關係著人體的防禦系統(body’s defense system)[2]、組織的形成與訊息傳遞路徑(signal transduction pathways)[3]，由於生物醫學以及基因技術的發達，許多研究實驗都與細胞脫離不了關係，有越來越多的實驗數據顯示，活體細胞感測到外來的機械刺激後，會經由訊息傳遞路徑做出反應，這些生物體反應會依序先改變細胞內部的結構，進而產生機械行為的改變[4]，例如細胞外部形貌變化，所以從傳統材料科學以及生物科學的觀點來看，揭露活體細胞的生長以及其蔓延，是非常重要的。近幾年來，由於明膠(gelatin)的生醫相容性以及其可隨溫度變化的凝膠特性[]，明膠材料在細胞以及組織工程領域也成為一個受歡迎且廣範使用的材料，明膠是一種普通的細胞外間質(extracellular matrix, ECM)蛋白，細胞的生長與生育能力透過鍵結於細胞外間質的調節，在複雜的組織中驅使器官型態發生[]，由明膠複合材料配合細胞培養的研究結果顯示[]，複合材料中，明膠重量百分濃度愈高，貼附生長的細胞密度愈高，顯示明膠成份可以幫助細胞生長，而另一研究提出利用熱敏感型水膠調製成感光高分子配合明膠製作明膠微圖案，具有明顯吸引細胞黏著特性[]，故也廣泛的被使用來作為組織創傷敷材(Wound dressing)[]加速癒合，除此之外，明膠是適合作為藥物釋放的生醫材料，經過戊二醛交聯劑交聯後，明膠可以提良好之生醫黏著特性，本研究嘗試利用戊二醛交聯明膠之微成型來製作明膠微圖案來吸引細胞作選擇性貼附生長，所製作的明膠微圖案具有比細胞尺寸更小之線寬，此明膠微圖案預期在細胞培養過程之細胞沈降與貼附階段會吸引細胞產生選擇性貼附，而另一個使用明膠材料作為細胞培養研究的原因在於其材料表面特性，其親水表面特性可以幫助刺激細胞生長[]，而明膠材料本身也符合此親水表面特性之要求。 在2004年有文獻提出以甲殼素(chitosan)為基材的生醫微影(bio-lithographic)[]，針對明膠熱敏感的特性，利用微壓印技術進行明膠微圖形的成型，但空間解析度侷限於毫米mm尺度。與其他利用微壓印技術(micro-contact-printing technique)、金屬薄膜自我組裝(self assembled monolayer on a micro-patterned metal surface)產生蛋白微圖形[33-35]，進而製作細胞微圖案的方法相比較，本研究群提出製作明膠微圖案的方法優點如下：第一、不需要額外的劑，可以直接將明膠附著於玻璃上，進而直接在基材上固定，最後成形明膠微圖案，這是選擇明膠作為研究材料的第一個原因。第二，以戊二醛成型明膠微圖形來製作細胞微圖案的方法，在製程上花費的成本較其他生醫方法低，運用上可以成功延伸至大面積、晶圓等級製程。第三，基材切割後，明膠微圖形晶片的尺寸可以盡可能縮小，減少昂貴細胞接種的需求量。第四，比起其他利用蛋白微圖形製作細胞微圖案的方法，經過戊二醛成型的明膠微圖案，在進行細胞培養的實驗之前，具有更長的保存時效，對於細胞培養前置作業有額外的便利性。 明膠材料人類使用明膠的歷史已經超過6,000 年，並且其應用的範圍也非常的廣泛，如