长链非编码RNANR033474对C3H10T05间质干细胞增殖的影响.docVIP

长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响 潘亚琼1，戴 忠1，左长清1，汪宗桂2(广东医科大学，1药理学教研室，2生物化学教研室，广东省东莞市　523808) 引用本文：潘亚琼，戴忠，左长清，汪宗桂. 长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响[J].中国组织工程研究，2017，21():766-772. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.05.019 ORCID: 0000-0002-5513-4343(汪宗桂) 文章快速阅读： 文题释义： 间质干细胞：具有自我更新和多向分化潜能，在体外不同因素诱导下可向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌腱细胞、心肌细胞和造血支持基质细胞等中胚层细胞系分化。因其具有良好的向成骨细胞分化的潜能，而成为组织工程、再生医学和细胞移植、基因治疗研究领域的理想种子细胞。 长链非编码RNA：是一类转录本长度超过200 bp的RNA分子，但因其成熟的转录本中存在众多终止密码子而不具有编码蛋白质能力。随着对长链非编码RNA研究的深入，人们逐渐意识到长链非编码RNA在许多生理过程中起到重要的调控作用，如细胞周期、细胞分化、剂量补偿和染色体印迹调控。但目前关于长链非编码RNA与干细胞增殖研究主要局限在肿瘤干细胞方面，研究表明多个长链非编码RNA如lncCAMTA1、ROR、BACE1-AS、MALAT1等分别参与调控肝癌干细胞、胃癌干细胞、卵巢癌干细胞和神经胶质瘤干细胞增殖。关于长链非编码RNA对正常干细胞增殖调控，目前只有少数几篇文献涉及。 摘要 背景：最近研究发现，长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化，但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用，目前尚不清楚。 目的：通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474，观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响，进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。 方法：通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474，应用Real-time PCR检测其表达效率，以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照，利用细胞计数法绘制生长曲线，观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化；PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变；通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后，细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。 结果与结论：①与对照组比较，感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P 0.01)；②与对照组比较，过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P 0.05)；③与对照组比较，过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期；④与对照组比较，过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调，P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化；⑤结果表明，NR_033474可能通过下调 Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平，抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力，使细胞阻滞于G2/M期。 关键词： 干细胞；分化；间质干细胞；长链非编码RNA；慢病毒感染；细胞增殖；细胞周期；国家自然科学基金 主题词： 间质干细胞；细胞增殖；细胞周期；细胞周期蛋白质类；流式细胞术；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金项目 Effect of long non-coding RNA NR_033474 on proliferation of C3H10T1/2 mesenchymal stem cells Pan Ya-qiong1, Dai Zhong1, Zuo Chang-qing1, Wang Zong-gui2 (1Department of Pharmacology, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, Guangdong Medical University, Dongguan 523808, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Recent studies have found that long non-coding RNAs (lncRNAs) can regulate stem cell proliferation and diffe