抗人尿激酶抗体对雌性小鼠生殖能力影响.pdf

抗人尿激酶抗体对雌性小鼠生殖能力的影 响 华中科技大学同济医学院计划生育研究所 研究生： 韩 研 导 师： 熊承良 教授 中 文 摘 要 第一部分 诱导雌性小鼠产生抗人uPA 抗体免疫方法和效价分 析 目的 建立一种利用人源uPA 分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠产生抗人uPA 抗 体的免疫方法，检测该免疫方法的有效性及稳定性。 方法 将性成熟雌性昆明小鼠随机分为5 组：空白对照组（不予任何处理）、佐 剂对照组（100 μl 生理盐水+等体积佐剂）、低剂量免疫组（20 μg/100 μl uPA+ 等体积佐剂）、中剂量免疫组（40 μg/100 μl uPA+等体积佐剂）和高剂量免疫组 （80 μg/100 μl uPA+等体积佐剂）。每2 周皮下多点注射免疫1 次，于第3 次免 疫后 1 周取其尾动脉血清以酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA ）检测各组抗体效价，另外加设一组，即阴性对照组（PBS 溶液代 替样本血清）便于ELISA 法检测中的比较。 结果 以ELISA 法检测各组血清样本中抗人uPA 多克隆抗体相对含量，uPA 三 个剂量免疫组与三个对照组（阴性对照组、空白对照组和佐剂对照组）相比，抗 人uPA 多克隆抗体相对含量是增高的，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）；免疫组 血清中抗人uPA 多克隆抗体效价均达到1：10240 以上。 结论 利用人源uPA 分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠产生抗人uPA 抗体的免疫 II 方法，不仅可以建立一种使小鼠体内产生稳定 uPA 抗体的实验方法，而且小鼠 体内的抗体可以达到较高水平。 关键词 uPA; 抗体; ELISA 第二部分 抗人uPA抗体对雌性小鼠生殖能力的影响 实验一 诱导雌性小鼠产生抗人uPA抗体后对其交配和妊娠情况的影响 目的 采用人注射用uPA 免疫雌性小鼠，小鼠体内产生抗人uPA 抗体后，观察 对雌性小鼠妊娠情况的影响。 方法 动物分组及免疫方法同第一部分，于免疫4 次后，分别将实验各组雌性小 鼠与未经任何处理的同周龄雄性小鼠进行交配实验，于妊娠第7 天解剖观察并记 录妊娠率、平均胚胎着床数目。 结果 uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠的妊娠率以及胚胎着床数目与空白和 佐剂对照组相比，妊娠率及胚胎着床数目降低，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）。 空白和佐剂对照组之间差异无统计学意义（P ＞0.05 ）。 结论 人注射用 uPA 免疫雌性小鼠，可干扰小鼠的生殖功能，使生育能力显著 下降，提示uPA 可能成为免疫避孕的有效靶点。 关键词 妊娠；着床；免疫避孕 实验二 诱导雌性小鼠产生抗人uPA 抗体后对其体外受精能力的影响 目的 研究采用人注射用uPA免疫雌性小鼠，小鼠体内产生抗人uPA抗体后，对 小鼠的卵细胞体外受精能力影响，探讨uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的机制。 方法 动物分组及免疫方法同第一部分，于第12次免疫后1周，给予各实验组雌 性小鼠PMSG/hCG促排卵后，获卵细胞团，记录卵细胞数目，与未经任何处理的 健康雄性小鼠精子进行体外受精实验，记录受精率。卵巢组织经4%多聚甲醛固 定，常规脱水、透明、 包埋、切片、染色，记录黄体数目。 结果 III 1.排卵数目 uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠排出的卵细胞数目分别与空白和佐剂对 照组相比，明显减少，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）；空白和佐剂差异无统计 学意义（P 0.05 ）。 2.体外受精率 与空白对照组相比，佐剂对照组、低、中、高剂量免疫组的受精率有所降低， 但是差异无统计学意义（P0.05 ）。 3.卵裂情况 A+B级的卵裂的胚胎率在中、高剂量组占的比例明显比空白对照组、佐剂对 照组和低剂量组要低，差异具有统计学意义（P ＜0.01 ）。空白