石河子某规模化猪场仔猪腹泻病原诊断.pdfVIP

万方数据 Diagnosis of main pathogens of diarrhea piglets in a scale pig farm of Shihezi A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Veterinary By Lv wen (Veterinary Master) Dissertation Supervisor: Prof. Yan-Genqiang June, 2014 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 摘 要 2012 年 1 月至 6 月份期间，新疆石河子周边某些猪场,2-7 日龄哺乳仔猪陆续发生 严重腹泻，先后死亡仔猪 800 余头，发病率 90%，死亡率 80%。患病仔猪精神沉郁， 食欲废绝，排黄色水样稀粪，病程 3-5d 。病理剖解可见：肠系膜充血严重，肠系膜淋 巴结肿大，小肠粘膜菲薄，剪开小肠其内容物呈黄色且含大量未消化的凝乳块。根据 临床症状、流行病学及病理变化初步诊断为大肠杆菌引起的仔猪黄痢；为进一步确 诊，对送检病料进行了致病菌的分离、生化鉴定、致病因子和毒力鉴定、病原体的分 子生物学诊断，结果如下： 1.无菌采取病死哺乳仔猪肠内容物、肠系膜淋巴结等病理组织，涂片染色、镜检， 同时将病料接种于 LB 肉汤中培养，将培养菌分别接种于麦康凯琼脂平板，兔鲜血琼脂 平板；对分离致病菌进行生化试验、分子生物学鉴定、药物敏感试验。结果表明：分 离株在麦康凯培养基上呈红色菌落；可使小白鼠在 8h 内死亡；生化鉴定及PCR 鉴定为 大肠埃希氏杆菌；分离株大肠杆菌对头孢菌素类和 β- 内酰胺类药物敏感。 2.通过 PCR 法和甘露糖血凝 MRHA 试验检测大肠杆菌的菌毛粘附素类型，采用兔 回肠结扎试验检测不耐热肠毒素 LT ，运用乳鼠胃内注射试验检测耐热肠毒素 STa 。 PCR 和 MRHA 结果表明本试验分离的大肠杆菌致病因子为 987P，兔回肠结扎试验未 检测到 LT ，乳鼠胃内注射试验未检测到 STa 。将致病大肠杆菌培养液 100℃煮沸 30min，取 0.5mL 注射给小白鼠，小白鼠在 8h 内死亡，表明分离株致病大肠杆菌可能 有其它种类的耐热肠毒素。 3.用 RT-PCR 法检测病死仔猪肠内容物中猪传染性胃肠炎病毒（TGEV ）和猪流行 性腹泻病毒（PEDV ），结果仅检测到 PEDV ，将 PEDV 的 M 基因和 N 基因与不同来 源的 PEDV 毒株进行比较分析，结果显示本试验检测到的 PEDV M 基因与其他已发表 的 PEDV 毒株 M 基因同源性为 97.9-99.7 ％，N 基因同源性为 95.1 ％-96.4 ％；试验检测 的 PEDV 的 M 基因与国内分离的 CH-SC2-2012 在同一分支上；PEDV 的 N 基因与国内 分离的 YT12-4 在同一分支上。试验室诊断确定该猪场发病的主要病因为携带 987P 菌 毛的致病性大肠杆菌和猪流行性腹泻病毒混合感染。 关键词：哺乳仔猪；大肠杆菌；987P ；PEDV ；PCR I 万方数据