碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性分析.pdfVIP

摘要 摘 要 目的: 探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP ）的耐药机制及同源 性。 方法： 收集南昌地区四家教学医院耐碳青霉烯类抗生素（亚胺培南和/或美罗培南） 的肺炎克雷伯菌 29 株，双纸片增效法检测 ESBLs （超广谱β- 内酰胺酶）、三维 实验检测 AmpC 酶、改良 Hodge 实验和双纸片协同法检测碳青霉烯酶，聚合酶 链反应(PCR ）扩增耐药基因，并对扩增产物测序，确定其基因型。接合试验评 价耐药质粒的可转移性。脉冲场凝胶电泳（PFGE ）对其进行同源性分析。采用 多位点序列分型技术（MLST ）对 CRKP 进行分子遗传学分析,应用 eBURST 软 件对多位点序列分型结果进行其种群结构分析。 结果： 29 株实验菌中有 19 株携带碳青霉烯酶基因，占 65.5%(19/29)，以 blaKPC-2 为主（44.8% ，13/29），其次为blaNDM-1、blaIPM-26 及 blaIPM-4 ，携带率分别为 17.2%、 10.3%及 6.9%，另还有 3 株同时携带 blaKPC-2 和 blaIPM-26 ，1 株同时携带 blaKPC-2 和 blaIPM-4 。17 株除携带碳青霉烯酶基因外，还携带 ESBLs 基因和（或）AmpC 基因，占 58.6% 。未检测到VIM 、GES、SPM 及 OXA 等其他碳青霉烯酶基因。 PMQR （质粒介导的喹诺酮类耐药基因）检出率为48.3%(14/29) ，其中qnrB 5 株， 包括 qnrB2 1 株、qnrB4 3 株、qnrB10 1 株；qnrS 5 株，均为 qnrS1 ；1 株同时携 带 qnrS1 和 qnrB4 ；aac(6)-Ib-cr 3 株。8 株 16S rRNA 甲基化酶基因阳性，其中 7 株 armA 阳性，1 株 rmtB 阳性。KP25 外膜蛋白基因 Ompk35 缺失，其他实验 株 Ompk35、Ompk36 均未缺失。29 株实验菌中有 27 株被 PFGE 成功分型，分 别属于 20 个不同克隆，其余 2 株分型不成功，属于同一克隆型且携带 blaKPC-2 基因的 4 株菌来源同一医院。29 株 CRKP 被 MLST 成功分成 16 个 ST 型，以 ST11 和 ST15 为主（各 5 株），其次 ST395 （3 株），ST334、ST273、ST147 （各 II 万方数据 摘要 2 株，），ST1128、ST42、ST1031、ST764、ST629 和 ST37 （各 1 株）,另有 4 个 新的 ST 型已被 Pubmlst 数据库确认收录并分别命名为 ST1369、ST1411、ST1412 和 ST1413。29 株实验菌对阿米卡星的耐药率较低外（37.9 ％）,对其他 15 种测 试抗菌药物的耐药率均大于 69 ％，其中对头孢呋辛、亚胺培南的耐药率为 100％， 多重耐药肺炎克雷伯菌的检出率为 62.1 ％(18/29) 。 结论: CRKP 耐药及多重耐药性严重，通过 29 株实验菌对临床常用的 16 种测试抗 菌药物耐药率的筛选，结果显示阿米卡星的耐药率最低（37.9 ％），提示临床可 以把阿米卡星选为治疗 CRKP 感染最有效的抗生素。携带碳青霉烯酶基因是肺 炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因 65.5%(19/29)，以 blaKPC-2 为主 （44.8% ，13/29）；尤为明显的是29 株 CRKP 中