磁珠标记法测定T618I突变型hERG钾通道的电生理特征及其药物反应性.pdfVIP

福建医科大学 目 录 中文摘要 1 英文摘要3 正文5 第一部分 磁珠标记法测定野生型 hERG 通道电流5 材料与方法5 结果9 讨论 17 第二部分 T618I 突变型hERG 钾通道的电生理特征及其药物反应性 19 材料与方法19 结果23 讨论42 参考文献45 综述48 致谢 57 3 万方数据 福建医科大学 中文摘要 背景和目的： 比较野生型和T618I 突变型hERG 钾通道的电生理特性，并观察T618I 突变 型hERG 钾通道对多非利特的药物反应性，以进一步揭示短QT 间期综合征的发病 基础，为其临床用药提供理论依据。 第一部分 磁珠标记法测定野生型 hERG 钾通道电流 方法： 利用免疫磁珠阳性标记法制作hERG 钾通道表达系统，测定野生型hERG 钾通 道的I-V 曲线、稳态激活曲线、稳态失活曲线、灭活时间常数，评价该系统的应 用价值。 结果： 采用35mm 平皿，2ug 质粒，5ul lipofectamine 转染试剂，在48-72h 时细 胞阳性率可达 10~20%。记录野生型hERG 钾通道电流在 20mV 时出现内向整流； 稳态激活曲线V 为-12.2 ±0.629 mV，斜率（k ）为11.8 ±0.587 mV；稳态失活 1/2 曲线V 为-11.9 ±2.75 mV，斜率（k ）为19.0 ±1.75 mV；灭活时间常数在10mV 1/2 后随电压升高而降低；动作电位钳刺激时，当电压为-40mV 时电流达峰值。 结论： 1.细胞最佳的转染配比为2ug 质粒，5ul lipofectamine 转染试剂。 2.所记录hERG 钾通道电流较典型，稳态激活和稳态失活均符合波尔兹曼方 程。 3.灭活时间常数及动作电位I-V 曲线均显示为典型的野生型hERG通道电流。 第二部分 T618I 突变型hERG 钾通道的电生理特征 及其药物反应性 方法： 利用免疫磁珠阳性标记表达系统记录T618I 突变型hERG 钾通道电流，比较 其与野生型电流的区别，揭示其导致心律失常的机制，观察其对多非利特的药物 反应性。 结果： T618I 突变型hERG 钾通道刺激电压在 60-70 mV 时出现不稳定，在80mV 以 上出现明显的内向整流特性；当刺激电位为-50 mV~ +50 mV 系列脉冲刺激时， T618I 稳态激活曲线与波尔兹曼方程拟合效果良好，V 为0.6623 ±1.167mV，斜 1/2 率（k ）为13.01938 ±1.208 mV；稳态失活曲线不符合波尔兹曼方程；动作电位 钳刺激的 I-V 曲线不对称，向左偏移；30nmol/L 的Dofetilide 可缩小突变型通 道电流，使其内向整流电压左移。 结论：