神经病靶酯酶在子痫前期疾病发生中的作用及其机制的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 滋养层细胞侵入异常是子痫前期发病的重要环节，其病因未明。近年，研 究显示神经病靶酯酶（neuropathy target esterase ，NTE ）与胎盘的发育密切相关， 其代谢调节的磷脂酰胆碱，注射至妊娠小鼠体内可诱导出子痫前期的模型，且 与滋养层细胞侵润密切相关，故推测NTE 可能参与子痫前期疾病的发生。本研 究拟探讨NTE 在子痫前期表达变化及其对胎盘滋养层细胞迁移及侵润的影响和 作用机制。 方法： （1）通过实时定量PCR 方法和免疫组化技术，检测NTE mRNA 和蛋白在 正常妊娠和子痫前期胎盘组织表达变化； （2 ）通过转染pEGFP-N3-NTE 和pGenesil-1-shNTE 质粒，在人HTR-8/SV- neo 滋养层细胞的产生NTE 过表达或抑制； （3 ）通过划痕实验和Transwell 方法，观察NTE 对HTR-8/SVneo 滋养层细 胞迁移和侵润的影响； 通过 MTS 实验，观察 NTE 过表达或抑制后对 HTR-8/SVneo 滋养层细胞增殖的影响； （4 ）通过明胶酶谱和ELISA 方法检测细胞上清液MMP-2 ，9 和TIMP-1，2 的变化； （5 ）通过Western blot 方法，观察NTE 对HTR-8/SVneo 滋养层细胞ERK- 1/2 和AKT 信号通路的影响. 结果： （1）通过实时定量PCR 检测显示，相对于正常妊娠的胎盘组织，在子痫前 期胎盘组织中，NTE mRNA 表达水平明显下降（p0.01 ）。 （2 ）通过免疫组织化学检测显示，正常妊娠胎盘和子痫前期胎盘组织中， NTE 蛋白表达于胎盘组织的细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞中。相对于正常 妊娠的胎盘组织，在子痫前期胎盘组织中，NTE 蛋白的表达水平明显下降。 （3 ）通过实时定量PCR 和Western blot 方法检测显示，相对于未转染Blan- k 组，pGenesil-1 组和Control shRNA 组NTE mRNA 和蛋白表达均无明显变化 （p0.05 ）。相对于Control shRNA 组，NTE shRNA 组，NTE mRNA （p0.05 ） II 万方数据 摘要 和蛋白（p0.05 ）表达均明显降低。相对于pGenesil-1 组，NTE-EGFP 组 NTE mRNA （p0.01 ）和蛋白 （p0.001）表达均显著性增加。 （4 ）通过划痕实验和Transwell 方法观察显示，相对于Blank 组，pGenesil- 1 组和 Control shRNA 组 HTR-8/SVneo 细胞迁移和侵润能力均无明显变化 （p0.05 ）。相对于Control shRNA 组，NTE shRNA 组HTR-8/SVneo 细胞迁移 和侵润能力均明显减弱（p0.01 ）。NTE-EGFP 组相对于 pGenesil-1 组， HTR-8/SVneo 细胞迁移和侵润能力均显著增强（p0.05 ）。 （5 ）MTS 分析显示，在体外培养24 h ，36 h，48 h ，相对于同时点各组， 20% FBS 阳性对照组，均明显促进HTR8/SVneo 细胞的增殖（p0.01 ），而在体 外培养1 h，24 h ，36 h， 48 h 及72 h，B