阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究论文.docVIP

　　阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究论文 常伟 孙汉英 黄敏 周剑锋 张义成 【摘要】 本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RTPCR、流式细胞术检测Gfi1、Bcl2、bax 基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、0.5、2.0 mg/L作用K562 细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自0.5增为2.0 mg/L时, Gfi1表达减少,bax表达增加;Bcl2表达在ADM 0.5-2.0 mg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异；当阿霉素浓度大于2.0 mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论： 一定浓度阿霉素能诱导K562 细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系, 阿霉素诱导K562 细胞凋亡可能与抑制Gfi1基因的表达和激活bax 基因的表达有一定的关系。 【关键词】 阿霉素 K562 细胞； 细胞凋亡； Gfi1； Bcl  2； bax Effect of Adriamycin on Gfi1 Expression in K562 Cells and Its Relationship ycin (ADM) on K562 cells in vitro and the mechanism of expression changes of relevant apoptotic genes and oncogene Gfi1. The apoptosis etry (FCM) and the DNA electrophoresis; the expression changes of Gfi1、Bcl2、bax mRNA and protein g/L ADM for 24 hours,.freelg/L, the expression of Gfi1 decreased and the expression of bax increased; g/L, the expression of Bcl2 RNA and protein g/L, the percentage of apoptotic K562 cells decreased echanism of apoptosis in K562 cells induced by ADM may be related to suppression of Gfi1 oncogene and activation of expression of bax gene. Key atol 2007; 15(2):278-282 阿霉素（adriamycin, ADM）在细胞凋亡中起着重要的作用,国内外有不少学者利用阿霉素成功地诱导了细胞凋亡，但对其作用机制还不完全清楚。为此,我们利用阿霉素诱导急性髓系白血病细胞株K562细胞凋亡,旨在了解阿霉素对细胞凋亡的作用机制,为今后临床血液系统肿瘤的治疗提供理论的依据。 材料和方法 试剂和细胞系 K562细胞由我院免疫学教研室提供,胎牛血清为杭州四季青公司产品, 阿霉素购自意大利Pharmacia 公司（批号：215002）,RPMI 1640 购于美国Gibco公司, 碘化丙锭(PI)购于北京中山生物工程公司。AnnexinV/PI试剂盒购自北京宝赛生物工程公司。RTPCR试剂盒购自华美公司。羊抗多克隆Gfi1、羊抗多克隆Bcl2、鼠抗单克隆bax购自美国Santa Cruz公司。兔抗羊及兔抗鼠FITC标记二抗购自北京中山生物工程公司。 中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2007; 15(2)阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因的研究细胞培养 K562 细胞培养于含有10%的胎牛血清的RPMI 1640 液中,在含5 % CO2饱和湿度的培养箱中常规传代培养。每2天进行半量传代。取对数期生长细胞,调整K562 细胞浓度至（2-5）×105/ml,接种于6孔的培养板,每孔加入2 ml细胞液,然后分别加入阿霉素的终浓度为0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0及5.0 mg/L，每个浓度取3个平行孔。每次实验重复3次。 DNA提取及电泳 以0 mg/L为对照组，0.5 mg/L、 2.0 mg/L的阿霉素作用于K562细胞24 小时后, 收集细胞1×106, 常规方法提取DNA , 溶于200 μl 1×TE。取12 μl 样品1%琼脂糖凝胶