阿霉素对人胆管癌细胞株FRH0201的生物学特性的影响论文.docVIP

　　阿霉素对人胆管癌细胞株FRH0201的生物学特性的影响论文 【关键词】 胆道肿瘤 阿霉素 肿瘤细胞,培养液 细胞周期 细胞大小 CA125 CA19 【摘要】目的：观察阿霉素长时间作用对胆管癌细胞株FRH0201生物学活性的影响。方法：用2μg/ml的阿霉素同一浓度逐渐延长时间作用于人胆管癌细胞株FRH0201细胞，经反复作用筛选出能在含1μg/ml的阿霉素培养液中生存72h，去掉阿霉素后仍能继续稳定传代生长的细胞。无药培养1月后进行生物学行为的监测。观察细胞形态学，绘制生长曲线和流式细胞仪测定细胞周期，酶联免疫吸附法测定细胞的肿瘤标记物，激光共聚焦显微镜观察细胞内的阿霉素的荧光强度。结果：阿霉素作用后FRH0201细胞形态学有轻度改变，细胞倍增时间较亲本细胞延长3h，与亲本细胞相比S期细胞增多16.89%.freell，1.59和2.96U/ml，细胞内阿霉素浓度（荧光强度平均值），亲本细胞为1764.8，试验组细胞为305.4。结论：阿霉素对胆管癌细胞株FRH0201的形态学及倍增时间无明显影响，但使细胞进入S期、G2期的增多，细胞内药物浓度明显降低，生长时间无明显变化。 【关键词】胆道肿瘤 阿霉素 肿瘤细胞，培养液 细胞周期 细胞大小 CA125 CA199 The effects of adramycin on the human liver hilar cholangiocarcinona cell line FRH0201 【ABSTRACT】Objective:To investigate the effects of adramycin on cell line of FRH0201.Methods:Human hilar cholangiocarcinona cell line ycin (2μg/ml) through lasting different times,finally this cell line can survive after 72h cultured in the culture liquid ycin(1μg/ml) .Then the medium ycin,and the cells onth.The in vitro studies included the observation of the appearance icroscope,MTT cell proliferation assay,analysis of the cell cycle by Floetry(FACS),assays of tumor marker using enzymelinked immunosor bent assay(ELISA),the fluorescence density of adramycin.Results:pared to the parent FRH0201cell line:The morphology shoorphological characteristics,the doubling time prolonged about 3h,the cell cycle by floetry identified in G1,G2 and S phase of cell cycle or marker has no difference bet,the fluorescence density of epirubicin descending 5.2 times.Conclusion:The adramycin can affect the cell cycle and cause the change of metabolism. 【KEY TT购自爱博生物工程有限公司，胎牛血清购自杭州四季青公司。胆管癌细胞株FRH0201由本课题组吴小鹏教授构建［2］。 1.2 方法 采用浓度相同不断增加作用时间的方法确定阿霉素培养液终浓度为1μg/ml。首先分别向FRH0201细胞株的培养瓶内加入不同浓度的阿霉素（Adramycin,ADR），培养3d后观察细胞死亡情况。结合阿霉素的血浆浓度，选择可将50%的细胞抑制的药物浓度（IC50）作为耐药细胞培养的起始浓度（2μg/ml），将肿瘤细胞置于该培养液中和不含药物的10%小牛血清RPMI1640培养液培养，待细胞稳定生长、进入对数生长期后，传代两次，再将筛选出的细胞在相同药物浓度培养液中继续培养。经过1，2，3，6，12，24，36，48，60，72h 10个时间段约8个月的培养，最终使细胞能够在1μg/ml阿霉素培养液中持续稳定生长并传代，然后脱药培养1个月在检测细胞的生物特性。 1.3 观察指标 1.3.1 形