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苦瓜藤多糖提取流程探析 作者：曾哲灵 奚光兴 葛晓环 单位：南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 南昌大学环境与化学工程学院 南昌大学生命科学与食品工程学院 1材料与方法 1.1材料与仪器苦瓜藤购自农村；牛血清蛋白购自美国Sigma公司；葡萄糖、考马斯亮蓝G-250、磷酸、苯酚、浓硫酸、盐酸溶液、氢氧化钠、无水乙醇等试剂皆为国产分析纯。KQ5200E型超声波清洗器（40KHZ，200W）昆山超声仪器有限公司；HH恒温水浴箱中大仪器厂；765pc型紫外-可见分光光度计上海光谱仪器有限公司；R系列旋转蒸发仪上海申生科技有限公司；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司 1.2实验方法 1.2.1苦瓜藤多糖的提取工艺流程新鲜的苦瓜藤晒干后，剪成2~3cm的小段，粉碎机粉碎，60℃条件下烘干至无游离水，取一定量的苦瓜藤藤粉末，按一定条件超声波提取后，离心取上清液，过滤，50℃真空旋转浓缩提取液，加入4倍体积的无水乙醇，4℃下醇沉8~12h，醇沉两次，离心，乙醚洗涤，烘干，得苦瓜藤粗多糖。 1.2.2葡萄糖标准曲线的制备[14-15]准确称取105℃烘至恒重的葡萄糖标品1g，蒸馏水定容至1L，移取2mL，用25mL的容量瓶定容，得0.08mg/mL葡萄糖标液。分别吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL葡萄糖标液于25mL比色管中，补足蒸馏水至2.0mL，加1.0mL6%苯酚，再加入5.0mL浓硫酸，摇匀，静置冷却至室温，在490nm处测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。葡萄糖含量与吸光度值经回归处理，回归方程为：A=14.373C-0.0133，R2=0.9969(n=8),糖含量在8～64mu;g线性良好，见图1。 1.2.3苦瓜藤多糖得率的测定[16]取提取液上清液，过滤，定容至250mL，分别吸取0.1mL提取液，补足水至2.0mL,测定吸光度值，根据测得的吸光度值A，参照葡萄糖标准曲线，计算出多糖浓度，进而得到得率。 1.2.4超声波提取单因素实验 1.2.4.1提取温度准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，料液比为1:40(g/mL)，pH为7，分别取30、40、50、60、70℃，超声提取20min，离心取上清液，过滤，计算多糖得率，每个因素做四个平行。 1.2.4.2料液比准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，温度为60℃，pH为7，料液比分别为1:20、1:30、1:40、1:50、1:60(g/mL)，超声20min，余下操作如1.2.4.1。 1.2.4.3提取时间准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，温度为60℃、料液比1:30(g/mL)，pH为7，分别超声10、20、30、40、50min，之后操作如1.2.4.1。 1.2.4.4pH准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，温度60℃、料液比1:30(g/mL)、超声时间30min，研究不同pH条件3、5、7、9、11下的多糖提取得率，余下操作如1.2.4.1。 1.2.5苦瓜藤多糖超声波提取的正交实验设计[17]在单因素实验的基础上进行L9(34)正交实验，因素水平表见表1。 1.2.6热水提取法单因素实验设计热水提取法单因素实验，并优化工艺，比较分析两种提取方法的优劣。以料液比、提取时间、提取温度这3个单因素为研究目标。 1.2.6.1料液比准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，温度70℃，料液比分别为1:20、1:30、1:40、1:50、1:60(g/mL)，热水提取90min，之后操作如1.2.4.1。 1.2.6.2时间准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，温度70℃、料液比1:50(g/mL)，分别浸提30、60、90、120、150min，之后操作如1.2.4.1。 1.2.6.3温度准确称取5.0g苦瓜藤粉末5份，料液比1:50(g/mL)、浸提时间90min，分别在50、60、70、80、90℃条件下提取，之后操作如1.2.4.1。 1.2.7苦瓜藤多糖热水提取的正交实验设计根据单因素实验结果，设计L9(33)正交实验，因素水平表见表2。 1.2.8超声波提取法与热水提取法的比较分别取5.0g苦瓜藤粉末2份，分别用超声波与热水提取的最佳工艺各提取2次，测定其多糖浓度，得出多糖得率，比较两种方法的提取效率。 1.3统计分析各组实验数据平行4次，结果以平均值plusmn;标准偏差的形式表示。数据采用GraphPadPrism（5.01版）进行分析，结果显示单因素数据的p值lt;0.05，具有统计显著性。采用正交助手Ⅱ（3.1版）对正交实验结果进行直观、极差和显著性分析。 2结果与分析 2.1超声波提取实验