青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答论文.docVIP

　　青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答论文 郑智茵，王建峰，胡致平，沈建平，高瑞兰，叶宝东，林圣云，沈一平 【摘要】 本研究探讨凋亡白血病细胞负载的树突状细胞（dendritic cells, DC）能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞反应。 用青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡, 从正常人外周血单个核细胞诱生DC.freell作用于U937细胞48小时后, U937细胞的凋亡率达51.52%, DC在未成熟阶段时吞噬DextranFITC的能力最强，负载凋亡U937细胞之后并不能促使未成熟DC（iDC）分化为成熟DC（mDC）。凋亡U937细胞负载后的iDC在TNFα的作用下能够成为mDC。与未负载的mDC相比, 凋亡U937细胞负载后的mDC（mDCApoU937）分泌IL12p70水平明显增高, 而且由其所激发和扩增的T细胞以CD8+的T细胞为主。细胞毒性实验显示: mDCApoU937诱导的T细胞的对U937细胞的杀伤显著超过对NB4细胞的杀伤。结论： mDCApoU937能有效地诱导特异性抗白血病效应。 【关键词】 白血病 Immune Response of Dendritic Cells Capturing Antigens from Apoptotic U937 Cells Induced by Artesunate Abstract The objective of study ic immune activity. The apoptosis of U937 cells peripheral blood mononuclear cells of health donors aturation in the presence of TNFα. Matured DCs phocytes, and bined iaspecific CTL. The phenotypes of DCs and T lymphocytes etry. The ability of DC capturing antigens easured by DextranFITC endocytosis. The IL12p70 level easured by MTT assay. The results shol ART for 48 hours in vitro. DCs had the most pomature phase. Apoptotic U937 cells could not induce the features of DC maturation,.freelmature DCs could be matured ature DCs（mDCApoU937） DC. The proliferation of autologous T lymphocytes cocultured DCApoU937 arkable and the content of CD8+ CTL DCApoU937 had stronger killing effect on U937 cells than NB4（p 0.01）. It is concluded that the mDCApoU937 can effectively generate T cellmediated 青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突细胞后的免疫应答 目前, 以树突状细胞（DC）为基础的免疫瘤苗已在淋巴瘤、黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的临床治疗中获得明显疗效, 但针对急性白血病的治疗尚处于探索阶段。我们以健康正常人外周血单个核细胞来源的DC负载用中药青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞作为研究模型, 观察凋亡的U937细胞负载DC刺激自体T细胞转化为细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力, 探讨用凋亡的白血病细胞负载DC作为DC疫苗的可能性。 材料和方法 主要试剂 正常人外周血白细胞层由浙江省中心血站提供；人单核细胞白血病细胞株U937由本院血液病研究所提供；人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4由浙江大学肿瘤研究所提供；青蒿琥酯（artesunate, ART）为中国桂林第二制药厂产品；rhGMCSF购自厦门特宝生物股份有限公司；rhIL4和rhTNFα购自美国Pepro Tech 公司；rhIL2购自沈阳三生制药股份有限公司；DextranFITC（4 kD）购自美国Sigma公司；IL12p70 ELISA Kit购自法国Diaclone公司；PE/FITC标记的鼠抗人CD3、CD4、CD8单克隆抗体购自美国Becton Dickinson公司； CD80、CD83、CD86、HLADR等购自美国Pepro