非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究论文.docVIP

　　非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究论文 .freelg/kg，并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示，致敏后DLI的受鼠（黑色）无1例出现GVHD，60天时转变为完全供者嵌合，表型明显呈现为供鼠（白色）特征，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降，半月后有所升高，但仍低于正常水平；未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD，嵌合率稍有上升，仍表现为混合嵌合体（MC），CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高，后期降至正常水平。结论：经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率，CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。 【关键词】 非清髓性异基因造血干细胞移植 Effects of Sensitized Donor Lymphocyte Infusion on the Chimerism and Graft-versus-Host Disease after Nonmyeloablative Allogeneic Stem Cell Transplantation Abstract To explore erism could be achieved and graft-versus-host disease could be alleviated by donor lymphocyte infusion ale C57BL/6 mice (H-2b，B6) as recipients received total body irradiation (TBI) of 5.5 Gy (60Co γ-ray) on day 0 folloatopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT). The allo-grafts consisted of 2×107 peripheral hematopoietic stem cells from mobilized male BALB/c (H-2d) donor mice ulating factor (G-CSF). Day 2 after allo-HSCT，the recipient mice g/kg cyclophosphamide intraperitoneally. Afterice phocytes at the 28 days after transplantation. The results shoice receiving sensitized-donor lymphocyte infusion did not suffer from GVHD and the phenotypic character of the recipient mice (black color) converted to that of the donor mice (erism. It phocytes of them decreased at the earlier period and increased after half month，but al value. NC 2×107个，移植后第2天予CTX 200 mg/kg腹腔注射。 供鼠淋巴细胞制备 移植后第1天起取B6小鼠背部皮肤1 cm×1 cm，埋入供鼠皮内，切口局部缝合。每周1次×4周，以致敏供鼠。第28天致敏与未致敏的供鼠分别经内龇静脉采血后以Ficoll分离淋巴细胞（分离方法同干细胞采集），用0.01 mmol/L的PBS液重悬细胞并调节细胞浓度至8×106/ml。操作均在无菌条件下进行。 实验分组设计 移植后每3天采血计数白细胞、称量体重，同时观察小鼠状态，排除死亡小鼠，待第21天造血恢复，体重稳步回升后将22只受鼠随机分为3组。A组：单纯移植组（n=6）；B组：第28天回输2×106个未致敏供鼠淋巴细胞（n=8）；C组：第28天回输2×106个致敏后供鼠淋巴细胞（n=8）。同时设预处理对照组，观察造血恢复及表型变化。所有受鼠均未给予GVHD防止措施。 GVHD主要观察指标 移植后每日观察小鼠体重、体形、体位、毛发、腹泻等，记录存活期，存活时间超过60天者为长期存活。每3天称量体重。死亡小鼠取肝脏、脾脏、小肠和爪垫皮肤组织大体形态观察后置于10%福尔马林液中固定保存，集中包埋、切片，HE染色后光学显微镜下观察，判断GVHD情况。 异基因嵌合体的测定 于移植后第21、60、90天分别经内眦静脉取各组小鼠外周血250 μl，EDTA抗凝后，应用Genomic DNA Purification试剂盒提取DNA，保存于-20℃。PCR