大鼠高眼压动物模型中视网膜热休克蛋白70的表达及其热耐受的调节作用.pdfVIP

大鼠高眼压动物模型中视网膜热休克蛋白70 的表达及其热耐受的调节作用术 福建医科大学附属第一医院 福建省眼科研究所 王婷婷 徐国兴 [摘要] 目的：探讨大鼠急性高眼压后视网膜神经节细胞HSP70的表达，并给予预先的热刺激(热休克)，观察热休克对视网膜神经 节细胞HSP70表达的调节。方法：56只Spragne-Dawley(SD)大鼠随机分为高眼压组、水浴+高眼压组，右眼为实验眼。高眼压组：右眼 前房穿刺，BBS灌注产生102nm-Ig静水压持续加压2h。水浴+高眼压组：给大鼠体温提高至4O．5～41，5~C／1Omin诱导出热耐受，3h后再 给予前房穿刺，产生102nvi-lg静水压持续加压灌注2h。免疫组化法测定视网膜神经节细胞HSP70的表达强度。结果：正常大鼠视网膜神 经节细胞可见少许HSP70的表达，高眼压组及水浴+高眼压组均在4dx时后视网膜经节细胞HSP70的表达增加，1 2d,时后达高峰，24小时 后开始回落，水浴后大鼠视网膜神经节细胞HSP70的表达基础水平提高 结论：热应激能诱导大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)内源性HSP70 的表达，从而提高RGCs对急性高眼压的耐受性，起到保护视神经的作用。 [关键词] 热休克蛋白质 视网膜神经节细胞 高眼压 热耐受 免疫组化 热休克蛋I~(heal shock protein，HSP)是一组所有的细胞能在应 1．3实验方法 激情况下由热休克基因所编码合成的序列高度保守的伴随细胞蛋 1．3．i实验动物 白，并能对抗更为严重的应激损伤，这种现象称为热休克反应(heat (1)分组：56只SD大鼠随机随机分为2组，分别为高眼压组、水 shock response，HSR) ”。目前认为热休克反应是细胞对各种不利因 浴+高眼压组。每组28只，右眼为实验眼。①高眼压组组：28只，随 素刺激所表现的一种以基因表达和调控方面发生改变的反应。目前 机分成7个亚组，每组4只。分别为：A：不予高眼压立即取材组；B： 的研究发现高温、缺氧、再灌注局部损伤或感染等多种有害因素刺 高眼压后立即取材组；C：高眼压后2 h取材组；D：高眼压后4 h取 激均可产生热休克蛋白l2I。 材组；E：高眼压后12 h取材组；F：高眼压后24 h取材组；G：高眼 HSP通常按分子量大小进行分类，主要有HSP70、HSP90、HSP60 压后36h取材组。②水浴+高眼压组：28只，随机分成7个亚组，每组 以及小分子HSP[3I。在HSP家族中，HSP70与神经保护有着最为密切 4只。分别为：A：水浴后立即取材组；B：水浴+高眼压后立即取材 的联系。研究发现高热诱导HSP合成后具有保护光感受器免受光损 组；C：水浴+高眼压后2 h取材组；D：水浴+高眼压后4 h取材组； 害的作用I I。而热耐受是否可以提高在体眼急性高眼压视网膜HSP70 E：水浴+高眼压后12 h取材组；F：水浴+高眼压后24 h取材组；G： 的表达而减少组织细胞的损伤，目前尚未见报道。为此，本研究在 水浴+高眼压后36 h取材组。(2)急性高眼压模型制作方法及水浴方 眼急性高眼压动物模型建立的基础上，研究眼急性高眼压后视网膜 法：急性高眼压模型按贾莉君等l5】介绍的方法，具体步骤如下：大 HSP70的动态表达情况以及热耐受后对在体眼急性高眼压视网膜 鼠予10％水合氯醛3mg／kg体重腹腔内注射麻醉后固定在鼠用立体 HSP70表达的调节，为急性青光眼的药物防治提供相关理论依据。 定位仪上，用4号半一次性输液针头作右眼前房穿刺，经一次性消毒 1 材料和方法 输液器连接乳酸钠林格氏液输液瓶，将液面高度调整至距实验眼水 1．1实验动物 平面1 387mm，使之产牛1 02 mmHg静水压，在大鼠右眼前房内持续 6O只清洁级SpragueDawley(SD)大鼠，鼠龄2—3周，雌雄不限， 加压灌注，2h后拨出针头，大鼠自行苏醒。水浴时将SD大鼠麻醉后 体重50—100g。实验前散瞳并行裂隙灯显微镜检查排除角膜病、葡 置于45℃恒温水中，肛温表测量其直肠温度达4O．5～41．5~c，维持 萄膜疾病、晶状体及玻璃体等疾病