蛋白质测量法96-98.pdfVIP

0 7 3 1 蛋 白质含量测定法 中国药典2015年版 加 热 回 流 3 0 分 钟 ，冷 却 后 ， 自 冷 凝 管 顶 端 加水 10m l冲洗冷 酸 铜 、硫 酸 钾 一 同 加热 消 化 时使 蛋 白 质 分解 ，分 解 的 氨与硫 凝 管 内 壁 ，将 皂 化 液 移 至 分 液 漏 斗 中 ，皂 化 瓶 用 水 60 〜 酸 结合 生 成 硫 酸 铵 。然 后 碱 化 蒸 馏 使 氨 游离 ，用 硼 酸液吸收 100m l分 数 次 洗 涤 ，洗 液并 入 分 液 漏 斗 中 ，用 不 含 过 氧 化 物 后 以 硫 酸滴 定 液滴 定 ，根 据 酸 的 消 耗 量 算 出 含 氮 量 ，再将含 的 乙 醚 振 摇 提 取 3 次 ，第 一 次 60m l，以 后 每 次 40m l，合并 氮 量 乘以 换 算 系 数 ，即 为 蛋 白质 的含 量 。 乙 醚 液 ，用 水 洗 涤 数 次 ， 每 次 约 100ml，洗 涤 时 应 缓 缓 旋 本 法 灵 敏 度 较 低，适 用 于 0 .2 〜 2. O mg氮 的 测 定 。氮转 动 ，避 免 乳 化 ，直 至水 层 遇 酚 酞 指 示 液 不 再 显 红 色 ，静 置 ， 化 成 蛋 白质的换算 系数因蛋 白质中所含 氨基酸的 结 构 差异 会 分 取 乙 醚 提 取 液 ，加人干燥 滤 纸 条 少许 振 摇 除 去乙 醚 提 取 液 稍 有 区 别 。 中 残 留的 水 分，分液 漏 斗及 滤 纸 条 再 用 少 量乙 醚 洗 涤 ，洗液 供 试 品 溶 液 的 制 备 照各品种项下规定 的方法制备，生 与 提 取 液 合并 ，置 具 塞 圆 底 烧 瓶 中 ，在水 浴上 低温 蒸 发 至约 物制品按如下方法操作。 5 m l , 再 用 氮 气 流吹 干 ，迅 速 精 密 加 人 甲 醇 3m l，密 塞 ，超 精 密 量 取 供 试 品 （如 供 试 品 为 冻 干 制 剂 或 固 体 粉 末 时 ， 声 处 理 助 溶 后 ，移 人 离 心 管 中 ，离 心 ，取 上清液 作为 供试品 应复 溶 后 量 取 ）适 量 ，用 0 .9 % 氣化 钠 溶 液 定 量 稀 释 ，制 成 溶 液 A 。 每 l m l 中 含 氮 量 约 l m g 的 溶 液 ，精 密 量 取 l m l，作为 总氮 供 净化用色谱系统分离 收集维生素D 精密 量 取 上述 供试 试品 溶 液 进 行测 定 。非 蛋 白氮 供 试品 溶 液 的 制 备 ，除另有规 品 溶 液 A 500^1, 注 人 以 十 八 烷基 硅 烷键 合 硅 胶为 填 充 剂 的 定 外 ，照 附 注 项 下 钨 酸 沉 淀 法操 作 ，即 得 。 液 相 色 谱 柱 ，以 甲醇 - 乙 腈 -水 （50 : 50 : 2) 为 流 动 相 进 行 分 测 定 法 除另有规 定外 ，按测定 法（1)操 作，生物制品 离 ，检 测 波 长 为 2 5 4 n m ,记 录 色 谱 图 ，维 生 素 D 与 前 维 生 按测 定 法（2)操 作 D 素 D 应 为 重 叠 峰 ，并 能 与 维 生 素 A 及 其 他 杂 质 分 开 。准确 1) 本 测 定 法适 用 于 不 含 无 机 含 氮 物 质 及 有 机 非 蛋 白 质 收 集 含 有 维 生 素 D 及 前 维 生 素 D 混 合 物 的 全 部 流 出 液 ，置 含 氮 物 质 的 供 试品 。精密 量 取各 品 种项下规 定的 供试品溶液 具 塞 圆 底 烧 瓶 中 ，用氮 气 流 迅 速吹 干 ，精密 加人正 己 烷 溶液 适 量 ，置 凯 氏 定氮 瓶 中 ，照 氮测定法 通 则 0704第二法 或 第