干细胞研究理论和实验.docVIP

中国临床康复 2006年6月10日 第10卷 第21期 干细胞研究的理论与实验 张绪斌等 张绪斌 解放军第二五一医院北京军区骨科研究诊疗中心 0引言 20世纪90年代以来，随着细胞生物学技术的发展及体外分离、培养人胚胎干细胞的成功，干细胞经适当诱导分化可发育为不同类型的细胞、组织和器官，成为移植供体的新来源，作为“种子细胞”的干细胞可以通过细胞工程的方法在体外发育为各种特异性的细胞供移植和细胞替代所需，并可作为基因疗法的靶细胞用于治疗和研究。由于干细胞有广泛的应用前景，它已成为近年来医学和生物学领域研究的热点。作者应用计算机检索Meclline数据库1980-01/2001-01有关文章，对干细胞的概念、调控、特征及应用进行综述。 1干细胞的概念 干细胞具有自我复制的能力，在一定条件下，它可以分化成各种功能细胞，根据其发育阶段，干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。传统观点认为，胚胎干细胞具有全能性，能分化为体内所有的组织和器官，而成体干细胞的分化潜能较弱，只能分化成特定的组织细胞。然而，横向分化的发现，使这个观点受到了挑战。那么胚胎干细胞和成体干细胞有什么关联呢? 当受精卵分裂发育成囊胚时，分离内细胞团的细胞经体外培养即得到胚胎干细胞。早在1970年Martin Evans已成功地分离出小鼠胚胎干细胞并在体外进行培养。而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。其实，胚胎动物生殖嵴部位的胚芽细胞同样具有自我复制和分化成各种功能细胞的能力，因此也隶属胚胎干细胞。 成年动物的组织和器官，比如上皮和造血系统，之所以具有修复和再生的能力，成体干细胞在其中起着关键的作用，在特定条件下，成体干细胞既可对称分裂为2个新的子代干细胞或2个功能细胞，也可不对称分裂为1个子代干细胞和1个功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。过去认为只有造血系统和上皮等组织含有成体干细胞，但最近的研究表明，成体干细胞普遍存在于人体的各种器官，为利用成体干细胞治疗疾病提供了可能。 2干细胞的调控 2.1内源性调控 不对称分裂对干细胞自我复制非常重要，而这一行为是通过干细胞内的一些结构蛋白和多肽因子调控的，比如在果蝇卵巢中，有一种称为收缩体的调节蛋白。收缩体与纺锤体的结合部位决定了干细胞分裂的位置，从而把维持干细胞性状所必需的成分保留在子代干细胞中，实现干细胞的自我复制。 转录因子对干细胞分化的调节也非常重要，比如，Oct4是一种哺乳动物胚胎细胞表达的转录因子，在胚胎干细胞的发生中，它通过诱导生长因子的表达和分泌，影响干细胞周围滋养层细胞的成熟，从而调节干细胞的进一步分化，Oct4缺失突变的胚胎存在发育障碍。 此外，端粒体的长度与干细胞的增殖和分化也有重要关系。敲除端粒体基因的小鼠，其造血干细胞的自我复制能力下降；雄性鼠的精细胞发育也受到障碍，因为端粒体的长度影响染色体的功能，因此染色体的功能状态可能决定了干细胞的命运。 2.2外源性调控除内源性调控外，干细胞的分化还受到其周围组织细胞及细胞外基质等外源性因素的影响。 2.2.1分泌因子至少有两类因子在不同组织甚至不同种属中调节干细胞的增殖和分化:转化生长因子和Wnt(编码一组调节胚胎发育的分泌蛋白质)家族，比如在角膜干细胞的分化中，转化生长因子作用于角膜缘干细胞周围的间质细胞，诱导间质细胞分泌各种细胞因子，包括血小板衍生生长因子和白血病抑制因子等，对角膜缘干细胞的增殖与分化具有调节作用。其他细胞因子，比如胶质细胞衍生的神经营养因子，不仅能够促进多种神经元的存活和分化，还对精原细胞的再生和分化有决定作用。Wnts的作用机制是通过阻止一种细胞黏附分子的分解，从而激活转录因子Tcf/Lef的表达，促进干细胞的分化。 2.2.2膜蛋白介导的细胞间相互作用 干细胞的调控也可通过细胞与细胞的相互作用而实现，比如，细胞膜表而分子Notch通过结合其配体Delt。或Jagged，从而在干细胞和周围细胞间传递信号，脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中，Notch信号起着非常重要的作用:当Notch与其配体结合时，干细胞进行增殖；当Notch活性被抑制时，干细胞进入分化程序，发育为功能细胞。 2.2.3细胞外基质对干细胞的调控 整合素家族是介导干细胞与细胞外基质黏附的最主要的受体，它通过直接激活多种生长因子受体，从而为干细胞的增殖提供适当的微环境，细胞外基质通过调节β1整合素的表达和激活，调节基底膜成分的变化和干细胞微环境中分泌因子的浓度，从而影响干细胞的分布和分化方向。 2.3 干细胞可塑性 越来越多的证据表明，成体干细胞被移植入受体中，表现出很强的可塑性。通常情况下，供体干细胞在受体中分化为与其组织来源一致的细胞，而在某些情况下干细胞的分化