纤维素酶BaEGA的基因克隆表达及结合结构域与催化结构域间相互作用的研究.pdfVIP

摘 要 纤维素酶在降解利用纤维素作为能源物质的过程中起到关键性的作用，对纤维素酶结 构功能的深入研究不仅可以丰富酶学研究的理论基础，还具有巨大的应用价值。 已经从福寿螺的胃液中筛选到了一个新的能够降解纤维素的微生物--Bacillus 具有耐高温碱稳定的优良性质。克隆其基因并在大肠杆菌中表达，可以获得丰富优质酶， 为工业生产提供平台。该酶还具有典型的纤维素结合结构域，可以作为结构域研究的模型。 在本部分工作中，我们克隆得到了编码纤维素内切酶Ba—EGA的基因Ba—ega。该基因 含有一个1980 bp的开放阅读框，编码659个氨基酸，预计其分子量为74．87kDa。此外， 保守结构域分析发现Ba—EGA是一个多结构域组件的纤维素内切酶，包含一个N端信号肽， 步的分析发现，具有相似构成(GH一9／CBM．3)的纤维素酶表现出一些类似的性质：适应较广 的pH域，较高的最适温度以及较好的温度稳定性。 为进一步研究Ba．EGA的性质特点以及它的两个结构域各自的性质功能，构建并在大 微晶纤维素的活力。 的这种作用不足以取代Ba—EGA中两结构域之问固有的相互作用，缺少共价键支撑的非共 价作用更容易受到温度等因素的影响。 目自d还没有研究将单独表达的结构域混合观测其性质，我们的研究明确了结构域间非 共价相互作用的存在。这些研究结果，有助于了解结构域相互作用的机理以及对纤维素酶 的结构功能的了解，对纤维素酶的分子改造也有着巨大的指导意义。 关键词：基因克隆催化结构域多糖结合组件(CBM)表达结构域相互作用 Abstract For in celluloseas havebeen a role energysource，cellulases playingkey hydrolyzing will to researchofthestructureandfunctionofcelhilasenot subjectedinvestigation．Thedeeply the alsocaterfor values． great onlyamplifyenzymologyknowledge，but applied Wehad anovel Ba—EGAfroma identified alreadypurified endoglucanase newly Bacillus some as microorganismsp．AC一1．Itpossessedunique makethe haveawideindustrial stability,etc，whichenzyme application． thermostability。basepH in fora andeasier The wasclonedand Escherichiacoli higher geneBa—ega expressed toindustrial andforafurtherresearchasamodelofdomains productioncompatible applicat