高效阴离子交换色谱2脉冲电化学检测方法和应用.PDF

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 4 期 　　　　　　 　　　　　 　　　　　　　 　　　　 2005年 4 月 Ch inese Jou rnal of A nalytical Chem istry 557～56 1 评述与进展 高效阴离子交换色谱 脉冲电化学检测方法和应用 丁永胜1, 2 　牟世芬 1 1 ( ) 2 ( ) 中国科学院生态环境研究中心 ,北京 100085 　　 北京大学药学院化学生物系 ,北京 100083 摘 　要 　评述了高效阴离子交换色谱和脉冲电化学检测方法 。内容包括 :色谱柱和流动相 ;糖和氨基酸在色 ( ) ( ) 谱柱上的保留行为 ;脉冲安培法 PAD 和积分脉冲安培法 IPAD ;方法在糖和氨基酸分析中的应用 。 关键词 　高效阴离子交换色谱 ,脉冲电化学检测 ,糖 ,氨基酸 ,评述 1　引　　言 20世纪 80年代以前 ,糖类化合物在离子交换树脂中的分离主要以硼酸盐络合的方式进行[ 1 ] ,高效阴 ( ) 离子交换色谱法 HPA EC 的出现为糖类物质的分离提供了简单和高效的手段 。糖和多数氨基酸缺少紫外 吸收 ,不宜直接用紫外或荧光法检测 。用 HPLC和 GC分析这些物质一般需要进行衍生化反应 ,增加了方 [ 2 ] ( ) 法的复杂性和难度 。1986年 John son 采用脉冲电化学方法 PED 直接测定糖类物质 ,为糖的分析提供了 有力支持 。当前 , HPA ECPED 已经成为糖类化合物分析的首选方法之一 ,并且逐渐进入氨基酸分析领域 。 2　高效阴离子交换色谱 2. 1　分离柱 高效阴离子交换树脂是由具有高强度和稳定性的有机聚合材料制成 。目前 D ionex公司可以提供以 下几种用于糖和氨基酸分离的色谱柱 [ 3, 4 ] 。CarboPac PA 1是由表面磺化薄壳型聚苯乙烯 /二乙烯基苯聚合 树脂和覆盖在树脂表面的键合季胺基团的乳胶微球组成 ,适于一般单糖、双糖和寡糖的分离 。CarboPac PA 10与 CarboPac PA 1类似专用于单糖和双糖的分离 , 由于其树脂具有更高的交联度和直径更小的乳胶微 球 ,这种色谱柱具有较强的有机溶剂兼容性和较高的柱效 。CarboPac PA 100是一种由乙烯基苯 /二乙烯基 苯聚合物为基质的薄壳型树脂 ,适于低聚糖的分析 。CarboPac MA 1是由氯乙烯苯 /二乙烯基苯聚合而成的 大孔型树脂 ,表面键和疏水性的烃基季胺基 。它的交换容量是以上分离柱的十几倍 ,适合弱保留糖醇类化 合物的分析 ,但是不能和有机溶剂兼容 。Am inoPac PA 10是以乙烯基苯 /二乙烯基苯聚合形成的微孔树脂 和覆盖的疏水性烃基季胺基乳胶组成 ,用于氨基酸 、氨基糖和糖的分离 。 2. 2　流动相 在 H PA ECPED 中 ,流动相比较简单 ,一般采用 N aOH 溶液和醋酸盐溶液 。分离半乳糖 、葡萄糖和 甘露糖等差向异构体和位置异构体时 ,流动相 N aOH 浓度低于 20 mmo l/L 。以低浓度 N aOH 为流动相的 ( ) ( ) ( ) 缺点有 : 1 每次进样前色谱柱需要再生处理 ; 2 保留时间重现性差 ; 3 需要柱后加入浓碱以提高被 测物的灵敏度 。也有人使用 5 ～20