植物种质的包埋脱水超低温保存.pdfVIP

植物生理学通讯 第43卷第6期，2007年l2月 植物种质的包埋脱水超低温保存 谷月，张恩栋，王起华 辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 1 16029 Cryopreservation of Plant Germplasm by Encapsulation-dehydration GU Yue，ZHANG En-Dong，WANG Qi-Hua‘ College ofLife Sciences，Liaoning Normal University,Dalian，Liaoning 116029,China 提要：文章介绍近l0年来有关植物种质包埋脱水超低温保存的研究进展，并对这一方法的应用前景作了展望。 关键词：包埋脱水法；超低温保存‘9植物种质 超低温保存为液氮低温(一196℃)下的保存， 类型不仅包括高等植物的茎尖、腋芽、分生组 在此温度下，细胞的物质代谢和生命活动几乎完 织、悬浮细胞、花粉细胞和体细胞胚等，也包 全停止。超低温保存技术具有长期保持种质活 括多种藻类材料(王君晖等1999；王起华等2002； 力，稳定遗传组成和避免基因多样性丧失等优 Flachsland等2006；Gonzalez—AITIao和Engelmann 点，因此认为是植物种质资源保存的理想途径 2006)。这说明在植物种质资源的保存中，包埋 (Reed等2004；Flachsland等2006)。迄今，所 脱水法对物种的依赖性较低，适用范围很广，因 采用的超低温保存方法主要有两步冷冻法、玻璃 此，得到人们的青睐。表1是国内外近1 0年来 化法和包埋脱水法(Shibli等2001)。其中，包埋 采用包埋脱水法保存植物材料的主要结果。1997 脱水法不需要昂贵的降温设备，不用有毒害的抗 年以前的结果可参见王君晖等(1999)的文章，本 冻保护剂，操作方便，可以同时处理大量样品 文不再赘述。 (Shibli等2001；Clavero．Ramirez等2005)，而且 2影响包埋脱水法保存效果的因素 材料化冻后不形成愈伤组织，可直接发育生长 在超低温保存操作过程中，在结冰温度范围 (Gonzalez．AITIao和Engelmann 2006)。这无疑是对 内，即0℃以下至低共熔点(液相和两种固相的三 超低温保存技术的一个重大改进。近年来，包埋 相共存点约为一135-~--139℃，在低于共晶点以下 脱水法在植物种植保存中应用广泛，且发展迅 的温度，水分子不再发生结冰作用)，细胞始终 速，不仅有更多的植物种类和种质类型采用此法 处于危险状态中，操作中的每一步失误都可能对 保存获得成功，而且在保存技术上也有了新的突 细胞造成致死性的伤害。因此，优化冰冻保存程 破(Sakai等2000；Gupta和Reed 2006)。本文介 序是提高保存效果的一个重要途径。此外，实验 绍了近1O年来采用包埋脱水法保存植物种质的研 材料本身的特性对存活率也有影响。以下就影响 究进展。 植物种质包埋脱水法保存效果的主要因素作简要说 1植物材料的包埋脱水保存 明 。 包埋脱水法最早出现在法国F a b r e和 2．1冰冻保存程序 Dereuddre(1990)保存马铃薯茎尖的研究中，此法 2．1．1预处]~(pretreatment)预处理包括实验材料 是将植物材料用褐藻酸钙包埋后，先在含高浓度 在包埋前的冷驯化和其他有助于提高抗冻性的处理 蔗糖的培养基中预培养，再用无菌空气流脱水，然 过程(Gonzalez．AITIao和Engelmann 2006)。很多研 后投入液氮中保存。此后，包埋脱水法的研究报 道逐年增加。迄今，已经有5O余属1O0种以上 的植物种质采用此法保存获得成