固相萃取一高效液相色谱法测定烟草样品中10种多酚.pdfVIP

第33卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第3期 2005年3月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 359—362 固相萃取一高效液相色谱法测定烟草样品中10种多酚 张 甜 董学畅 吴方评 杨光宇 乔永峰 (云南民族大学化学与生物技术学院，昆明650031) (云南烟草科学研究院，昆明650106) 摘 要 研究了用固相萃取预分离，高效液相色谱法测定烟草样品中的lO种植物多酚。烟草样品中的多酚 提取液用Sep—Park-Cl8固相萃取小柱预分离脱脂，以WatersNova—Pak-Cl8(3．9lnln×150lnln，5wm)色谱柱为 固定相，0．05mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液和甲醇梯度洗脱为流动相，烟草中主要的植物多酚均达到基线分离； 用紫外二级管矩阵检测器检测，得出各组分在其最大吸收波长下的色谱图，根据该色谱图的峰面积定量，并用 紫外光谱图对烟草中主要多酚进行辅助定性。标准回收率为94％一105％；RSD为 1．3％一1．5％。用该方 法测定了烟草样品中的lO种植物多酚，结果令人满意。 关键词 高效液相色谱，固相萃取，多酚，烟草 1 引 言 植物多酚是烟草中一类重要物质，其在烟草中的含量对烟草质量有重要影响；因而研究烟草及其制 品中的植物多酚具有重要意义¨，2J。烟草多酚的测定方法主要有分光光度法、气相色谱法和液相色谱 法等 J。光度法准确性较差而且只能近似测定总量；气相色谱法需要复杂的衍生化；传统的液相色谱 法样品前处理时需用有机溶剂对样品进行脱脂处理，操作较麻烦，且会造成多酚损失。近年来固相萃取 技术已在分析化学中得到广泛应用 ¨ ¨，实验研究了用WatersSep-Park．C。。固相萃取小柱预分离脱脂， 高效液相色谱分离测定烟草中主要成分多酚；并通过紫外光谱图对主要多酚作辅助定性。该方法可同 时测定烟草中的l0种多酚，将其用于烟草样品分析，取得满意结果。 2 实验部分 2．1 仪器和试剂 Allaince高效液相色谱一质谱联用仪 (美国Waters公司)，包括2690分离系统(四元泵、柱温箱及 自 动进样器)；996(PDA)紫外二极管矩阵检测器；Millennium 色谱管理软件。甲醇为高效液相色谱专用 (Fluka公司)；水为石英亚沸蒸馏水并用 Milli-Q50(美 国Millipore公司)超纯水仪处理，电阻率 ≥ l8Q ·cm；KHPO 为HPLC级(Fluka公司)；5一O一咖啡-d-奎尼酸、绿原酸、4-D一咖啡-d-奎尼酸、咖啡酸、七 叶亭、莨菪宁、莨菪葶、芸香苷、莰菲醇一3一芸香糖苷、槲皮素标样(分别购于Fluka公司和Sigma公司，含 量 95％)。 2．2 色谱条件 色谱柱：WatersNova—Pak—Cl8液相色谱柱(3．9mill×150mil1)，WatersSep—Prak—Cl8固相微萃取小柱； 流动相为：A．甲醇；C．0．05mol／LKHPO 组成的缓冲溶液，按开始(10％A+90％C)，15min(80％A +20％C)，20min(80％A+20％C)，25min(10％A+90％C)线性递增(减)的梯度条件，平衡 10min 后 自动进下一个样品，流速为0．5mL／min。进样体积 l0 。上述色谱条件下标样及烟草样品在345 nm波长处色谱图见图1。烟草样品中主要组分有10个峰。 2．3 样品处理 烟样品粉碎过0．18mill筛，称取约0．2000g，加入45mL80％甲醇水溶液加热回流30min，冷却，过 滤并定容到50mL，取5mL滤液，以10mL／min流速通过预处理好的Sep—Prak-C。。固相萃取小柱，弃去 最初的3mL，收集后面的2mL用0．45 针头过滤器过滤，进样 l0 分析。 2003—12—10收稿；2004-041·9接受 本文系云南省烟草专卖局科研基金资助项 目(No．2000B201) 分 析 化 学 第33卷 3 结果与讨论 3．1 分离条件的选择 用甲醇一水作流动相，多酚不能获得很好的分离，而且 峰拖尾严重。