动物布病诊断技术.pptVIP

虎红平板凝集试验 材料准备 抗原、标准阳性血清、阴性血清由指标单位提供，按说明用。 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。 准备一块洁净玻璃板，画成若干个4厘米小格或虎红平板凝集试验卡片。 吸管或移液器，适于滴加0.03ml（即300μl）液体。 牙签或火柴杆供搅拌用。 操作方法 将玻璃板上各格标记受检血清号(或在布病反映卡上操作)，然后加相应血清0.03ml。图1. 在受检血清旁滴加抗原0.03ml。 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。图2 每次试验应设阴性、阳性血清对照 结果判定 判定结果前最好将抗原与血清混合物摇动几下.如图3. 在阴性、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。 被检血清在4分钟内出现肉眼可见的凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）。图4.图5 每份被检血清在规定时间内出现凝集反应者判为阳性，不出现凝集为阴性反应。 注意事项： 本抗原适合于大数量田间检疫和筛选诊断试验用。 本试验出现阳性反应的动物，需经补体结合试验或其它辅助试验方可定性。 本抗原使用前应充分摇匀，方可使用。 凡本抗原出现污染或摇不散的凝集块者不得使用。 布鲁氏菌病乳环试管凝集试验 材料准备： 布病全乳环状抗原，由指标单位提供，按说明用。 乳样 受检乳样须为新鲜全乳。 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可适用。 需要器具有：水浴锅、100μl移液器、1000μl移液器、小试管、试管架、移液器枪头、乳环抗原等。 操作方法 取乳样1ml，加于灭菌凝集试验管内。 取充分震荡混合均匀的全乳环状抗原1滴（约50μl）加入乳样中充分混匀。 置37℃～38℃水浴中60min。 加热后取出试管勿使震荡，立即进行判定。 结果判定 强阳性反应（+++），乳柱上层乳脂形成明显红色环带，乳柱白色，临界分明； 阳性反应（++），乳脂层的环带呈红色，但不显著，乳柱略带颜色； 弱阳性反映（+）乳脂层的环带颜色较浅，但比乳柱上颜色略深； 疑似反映（±）乳脂层的环带颜色不明显，于乳柱分界不清，乳柱不褪色； 阴性反映（—）乳柱上层无任何变化，乳柱颜色均匀。 布鲁氏菌病试管凝集试验 材料准备 稀释液：0.5%石碳酸生理盐水。检验羊血清时用含0.5%石碳酸的10%盐溶液，如果血清稀释用含0.5%石碳酸的10%盐溶液，抗原的稀释亦用含0.5%石碳酸的10%盐溶液。 1.2抗原、阳性血清、阴性血清由指标单位提供，按说明书使用。 1.3 凝集试验管（三分管）、试管架、吸管及温箱等。 操作方法 1.按常规方法采血分离血清。 2.运送和保存血清样品时防止冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送检，按每9ml血清加1ml5%石碳酸生理盐水防腐，也可冷藏方法运送血清。 3.被检血清的稀释 以羊和猪为例，每份血清用4支凝集试管。 3.1 第1管标记检验编码后加1.15mL稀释液。 3.2 第2～4管各加入0.5mL稀释液。 3.3 然后向第1管内加入0.1mL被检血清，并混合均匀。充分混匀后弃去混合液0.25mL。 3.4 取0.5ml混合液加入第2管，混合均匀。 3.5 再吸第2管混合液0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去混匀液0.5mL。 3.6 稀释完毕，从第1至第4管的血清稀释度分别为1:12.5、1:25、1:50和1:100。 3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与上述基本一致，差异是第1管加1.2mL稀释液和0.05mL被检血清。 3.8 将0.5mL稀释好（具体稀释倍数参照试剂生产厂家的要求，一般是1：10）的抗原加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，羊和猪的血清稀释则依次变为1:25、1:50、1:100和1:200，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1:50、1:100、1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、马、鹿、骆驼用1：50和1：100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25和1:50。 布鲁氏菌病试管凝集反应试验（羊、猪） 布鲁氏菌病试管凝集反应试验（牛） 3.9 每次试验均应设阳性血清、阴性血清和抗原对照， a)阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清相同。 b)阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴度，加抗原的方法与被检血清相同。 c)抗原对照：稀释好的抗原液0.5ml,再加0.5ml稀释液，观察抗原是否有自凝现象。 3.10 将稀释好各管置37℃～40℃温箱24小时，取出检查并记录结果。 结果判定 1供判定参照比浊管制备方法略 2 结果判定 2.1凝集成度分为： 参照比浊管，按各试管上层液体清亮度判读 ⑴＋＋＋＋菌体完全凝集