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石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究.pdf
安徽农业科学,Journal ofAnhui Agri.Sci.2007,35(36):11775—11777 责任编辑 孙红忠 责任校对 李洪
石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究
刘素霞,洪达,高武军,邓传良,卢龙斗 (河南师范大学,河南新乡453007)
摘要 利用正交试验设计,从Mg 、dNTP、引物、酶4种因素3个水平上对石榴RAPD反应体系进行优化,确立了适合石榴RAPD反应体
系:在25tJ反应体系中,含1×PCR bL曲 、2.5mmol/L k、200tanol/L d/VIP、0.2tanol/L引物、50 rig模板DNA、0.5 U T,w DNA聚合酶。
通过梯度P( 测验,确定了适宜的退火温度37℃。利用优化的RAPD反应体系对l1个石榴品种进行亲缘关系分析,结果表明,l1个品
种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,l1个品种被明显分为临选1号、净皮甜、新大甜、临选14号;大粒三白甜、大青皮酸、
小红皮酸、白花、江石榴、薄皮糙、玉石籽两个类群。因此,这一优化体系适合于石榴品种间的亲缘关系鉴定。
关键词 石榴;RAPD;正交设计:梯度PCR
中图分类号 $665.4 文献标识码 A 文章编号 晒17—6611(2007)36—11775—03
Study On oca,,,izat~n for RAPD Reaction System and Genetic RelationshiD in Pun/ca granatmn
UU Su-xia et al (Henan Normal University,Xinxiang。Henan 453007)
Abstract In this study,onhogonal design WaS used to optimize RAPD amplification system on pomegranate of four factors:M dNrP,primers and Taq
,
DNA ymerase in three levels respectively.A suitable RAPD reaetlon system WaS establishednamely,25 reaction systern containing l×PcR buffer.
,
2.5 mmol/L MgCl2,200./anol/L dN11P,O.2 tanol/L primel,50 ng DNA template and 0.5 U I DNA polymerase.The optireal annealing temperature for
RAPD-PCR reaction system was proposed by gradient PcR.()n che basis of this optima/reaction system the svstematic classification of l 1 cuJdvars 0f
.
pomegranate Was studied.It was revealed that the polymorphism atRAPD mark in£he l1 cultivars WaS very high. and the variance Was large.The result of
clustering also showed that l1 cultivars could be clssified into two groups:Linxuan No
. 1,Jingpitian,Xindatian,Linxuan No.14;Dalisanbaitian.Daqing.
pisuan,Xiaohongpisuan,Baihua,Jiangshiliu,Baopizao aI1
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