尿嘧啶DNA糖基化酶.PDF

尿嘧啶DNA糖基化酶 Uracil-DNA Glycosylase(UNG 酶) 一、产品规格 100ul 1U/ul -20℃保存 二、产品简介 尿嘧啶 DNA糖基酶（UDG）来源于大肠杆菌重组克隆表达。该酶分子量为 25KDa，它催化含尿 嘧啶的单链和双链 DNA释放游离尿嘧啶，它对 RNA 无活性。主要应用于 PCR 扩增产物的防污染。 它的作用原理基于：在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中，形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增 产物，Uracil-DNA Glycosylase 能选择性断裂单链和双链 DNA中 U 碱基的糖苷键，降解 PCR 扩增 产物。 三、单位定义 37ºC-50ºC，1 小时，可降解 1mg 含 dU 碱基的单链 DNA 的酶量为 1 单位。 四、酶储存缓冲液 50% glycerol, 30mM Tris-HCl (pH 7.5), 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20。 五、反应缓冲液 10 x Reaction Buffer : 100mM NaCl, 200mM Tris-HCl (pH8.0), 10mM EDTA, 1mg/ml BSA。 六、使用介绍 1、 Taq 酶与 UNG 酶的反应缓冲液和酶储存液可以通用。 2、 通常将 Taq酶与 UNG 酶按一定的比例加入 PCR反应体系中，先 37ºC-50ºC 2 分钟，进行 dUTP 的消化，然后 94ºC4 分钟灭活，（同时这一步也达到预变性的效果），随后做 PCR 扩增。 3、 PCR 反应体系配制示例 1 热线电话：021－5446 0832 8009881995 E-mail:master@ 网址： 反应液组份 加量 (μl) 终浓度 备注 10×PCR buffer 5 1× 上游引物 5 50~900nM 下游引物 5 50~900nM dATP （10mM） 1 200nM dGTP （10mM） 1 200nM dCTP （10mM） 1 200nM dTTP （10mM） 0.5 100nM dUTP （10mM） 1 200nM 如果用全U 则，终浓度为400nM Mg2+ （25mM） 3 1.5mM Taq 酶（5U/ul ） 0.5 UNG 酶（1U/ul） 0.5 如果污染严重，可适当增加用量 模板 5 ddH O 21.5 2 总体积 50 4、反应条件：37℃-50ºC 2 分钟，94℃4 分钟，然后 94℃30 秒 55℃30 秒 72℃60 秒 40 个循环，最后 72℃5 分钟。 七、质量控制 1．活性：大于 1u/ul。 2. Overdigest (OD) 检测: 5 单位 UDG与 1 微克λDNA 在37ºC 下反应16小时后，用琼脂糖凝胶 电泳未检出降解的 λDNA。 3．DNase Assay: 5 单位UDG 与50ng 3H- DNA 在37ºC 下反应4小时，分解出的释放量小于 1％。 4．Nickase Assay: 5 单位 UDG 与1*g 超螺旋 DNA在 37ºC 下反应 4 小时 DNA 的电泳图谱不发生 变化。 八、注意事项 1．长期储存 (