·基础研究·骨髓基质干细胞-80℃保存的初步研究.PDFVIP

·754 · 中国骨伤 2007年 11月第 20 卷第 11期 　Ch ina J O rthop Traum a,Nov. 2007 , Vol. 20 ,No. 11 ·基础研究 · 骨髓基质干细胞 - 80 ℃保存的初步研究 蓝旭 ,文益民 ,葛宝丰 ,刘雪梅 ( ) 解放军兰州军区总医院脊柱外科 ,甘肃 　兰州 　730050 　　【摘要 】　目的:探索适合于人骨髓基质干细胞 - 80 ℃冷冻保存的条件和方法 。方法 :体外分离培养人骨髓基质 干细胞 , 以含不同浓度二甲亚砜的冻存液和不同细胞浓度 - 80 ℃深低温保存 。3 个月后复苏接种培养 ,观察细胞形 3 (3 ) 3 (3 ) 态 、存活率和贴壁率 ;通过 H 胸腺嘧啶脱氧核苷 H TdR 掺入实验比较细胞分裂增殖能力 ; H 脯氨酸 H Proline 掺入实验检测胶原合成能力 ; R TPCR 法检测 Ⅰ型胶原和骨钙素 mRNA 表达 。结果 :不同二甲亚砜浓度保存骨髓基质 干细胞复苏后的细胞形态和功能有所不同 ,其中含 5%二甲亚砜冻存液组保存效果最差 , 15%组最佳 。15%二甲亚砜 ( ) ( ) 冻存液组复苏后骨髓基质干细胞的形态与未冻存组相似 ,存活率为 85% ±3% ,贴壁率为 81% ±5% 。骨髓基质 干细胞保持较强的分裂增殖和胶原合成能力 , Ⅰ型胶原和骨钙素 mRNA 表达与 5%或 10%二甲亚砜冻存液组比较有 ( ) ( ) 6 ( ) 统计学差异 P 005 。冻存骨髓基质干细胞浓度为 5 ～10 ×10 个 /m l组复苏后细胞存活率明显优于 1～2 5 × 6 10 个 /m l组 。结论 :含 15%二甲亚砜的冻存液适合于骨髓基质干细胞长期保存 ,高浓度组骨髓基质干细胞冻存效果 优于低浓度组 。 【关键词 】　骨髓基质干细胞 ; 　细胞 ,培养的; 　低温保存 ; 　二甲亚砜 A prelim inary study of cryopreserva tion of m arrow strom a l cells a t - 80 ℃　LAN X u, W EN Yim in, GE B aof eng, L IU X uem ei. D ep a rtm en t of Sp ine S u rg ery, the Genera l H osp ita l of L anzhou M ilita ry Comm and, L anzhou 730050, Gansu, Ch ina A BSTRACT　O bjective: To exp lore the condition and m ethod for cryop res