一种高效提取高海拔地区土壤微生物总DNA的方法.pdfVIP

第 22卷 第4期 北 京 农 学 院 学 报 VoI．22，No．4 2007年 1O月 JOURNAL OF BEIJING UNIVERSITY OF AGRICULTURE 0Ct．．2007 一 种高效提取高海拔地区土壤微生物总DNA的方法 刘振静 ，杨 凯 ，李潞滨 ，周金星 (1．中国林业科学研究院林业研究所 国家林业局林木培育实验室，北京 100091； 2．应用新技术北京市重点实验室，北京 102206) 摘 要：为优质、高效地提取高海拔地区土壤微生物基因组DNA，在综合了多种土壤微生物DNA提取方法的 基础上，采用双酶一改良酚氯仿 DNA提取法提取了3份高海拔地区土壤样品的DNA，同时比较了其他 3种常 用方法的提取产率和纯度，该方法优于其他3种方法。采用PVP缓冲液预洗，去除腐殖酸；DNA提取液、溶菌 酶和蛋白质酶 K共同裂解土壤微生物细胞，保证获得大片段的DNA，提高DNA产率；酚氯仿法抽提，简便易 操作，能有效地去除蛋白质和其他杂质。该方法是一种简便高效、适用于高海拔、生境类型复杂的土壤样品 DNA提取的方法，DNA质量可满足PCR扩增的要求。 关 键 词：DNA；提取方法；高海拔；土壤 中图分类号：S154．3 文献标识码：A 文章编号：1002—3186(2007)04—0026—03 Efficient Method for Microorganism Genomic DNA Extraction from High Altitudes Soil Samples LIU Zhen-j ing ”，YANG Kai。，LI Lu—bin ，ZHOU Jin—xing (1．Key Laboratory of Tree Breeding and Evaluation，State Forestry Administration，Research Institute of Forestry， Chinese Academy of Forestry，Beijing 100091，China； 2．New Technological Laboratory in Agricultural Application in Beijing，Beijing University of Agriculture，Beijing 102206，China) Abstract：A double enzymes and phenol—chloroform extraction was introduced，for efficient microorganism genomic DNA extraction from high altitudes soil．To remove effectively humid acid，soil samples were pre— washed by polyvinylpyrrolidone(PVP)buffer，DNA—extracting buffer，bacteriolysin and proteinase K were used to lysis cells，getting amounts of DNA segments．The phenol—chloroform method is used to eliminate protein and other impurities．This method is simple and efficient，suitable for microorganism genomic DNA extraction from high altitudes． Key words：DNA；extraction method；high altitudes；soil 土壤是生态系统中进行物质循环和能量转化的 分子操作的物质_2 ]，从土壤样品中高效地提取微 重要场所，土壤微生物则是这两个功能的主要完成