以涂敷型硅胶为基质的弱阳离子交换色谱固定相的制备及其在生物大分子分离中的应用.pdfVIP

第28卷 第4期 宁夏大学学报(自然科学版) 2007年12月 Vo1．28 No．4 Journal of Ningxia University(Natural Science Edition) Dec．2007 文章编号：0253-2328(2007)04—0350—04 以涂敷型硅胶为基质的弱阳离子交换色谱固定相 的制备及其在生物大分子分离中的应用 邢 彬， 常 璇， 龚波林 (宁夏大学 能源化工重点实验室，宁夏 银川 750021) 摘 要：在大孔硅胶表面键合乙烯基硅烷化试剂，然后与甲基丙烯酸环氧丙酯、甲基丙烯酸乙二醇双酯共聚，制得聚合物 涂敷硅胶，其表面经水解再与丁二酸酐反应，得到一种新型的弱阳离子交换色谱填料(Weak Cation Exchange，WCX)，考察 了该填料对标准蛋白的分离性能，以及流速、pH值对蛋白质保留的影响．实验结果表明，在流速为3mL／min时，采用线性 梯度洗脱，2 min内可快速分离肌红蛋白、核糖核酸酶、细胞色素一c和溶茵酶4种标准碱性蛋白质，蛋白质的保留符合阳离 子交换色谱保留规律． 关键词：弱阳离子交换填料；硅胶涂敷；生物大分子分离 分类号：(中图)0657．7 文献标志码：A 由于高效液相色谱法分离柱效高、选择性好，因 道了一些这样的涂敷型填料，左育民[2 等以丙烯酸 此，成为当今分离和分析生物大分子的强有力的手段． 甲酯和丙烯酸辛酯为单体制备出的涂敷型填料；杨 色谱技术的核心是色谱柱填料，传统的高效液相色谱 瑞琴等 ]以聚硅氧烷为单体制备出的色谱填料均用 填料主要包括硅胶和有机聚合物微球，但是硅胶键合 于有机小分子的分离；陈立仁等 制备出涂敷型阳 固定相残留硅羟基导致的“第二效应”和有机聚合物刚 离子交换填料，用于无机金属离子的分离与应用． 性差的缺点，限制了它们在生物分析中的应用．将硅胶 本文采用亲水性单体甲基丙烯酸环氧丙酯与键 和有机聚合物结合起来，用无机微粒硅胶作载体，外层 合有乙烯基的大孔硅胶，以甲基丙烯酸乙二醇双酯 包覆聚合物层，可得到一种新型的复合填料．该填料既 为交联剂共聚制备了涂敷型硅胶，其表面经水解再 具备硅胶基质固定相的高效耐压等特点，又具备有机 与丁二酸酐反应，得到一种新型的弱阳离子交换色 聚合物基质固定相pH值使用范围宽、稳定性好的优 谱填料(Weak Cation Exchange，WCX)，该填料对 点，被称为“未来的HPLC分离介质”，有取代传统硅胶 蛋白质分离效果好，且分离速度快．结果表明，此阳 基质高效液相色谱填料的趋势口 ]． 离子交换填料性能优异，适合于生物大分子的快速 分离和分析． 国外报道较多的制备涂敷型填料的方法是先将 硅烷化试剂与交联的有机单体共聚后再与硅胶反 1 实验部分 应．Kataev[3 采用此方法将聚三氟苯乙烯涂敷于硅 1．1 仪器及试剂 胶上制备出反相色谱填料，用于有机小分子的分离． Kurganov_4 将聚乙烯吡咯烷酮涂敷在硅胶上制备 AGILENT一1100型高效液相色谱仪(美国安捷 出体积排阻色谱和疏水色谱填料，并应用于生物大 伦科技有限公司)，CGY一100型高压气动泵(北京福 分子的分离，但所需的分离时间较长．现今，涂敷型 思源机械加工部)，电动搅拌机(常州国华电器有限 填料的制备有了很大的发展和改良，先将硅胶与硅 公司)，HH-2型数字显式恒温水浴锅 (常州国华电 烷化试剂反应