原位杂交检测B细胞淋巴瘤免疫球蛋白轻链限制性.pdfVIP

齐齐哈尔医学院学报2007年第28卷第2O期 原位杂交检测B细胞淋巴瘤免疫球蛋白轻链限制性 杨书云(综述) 何松(审校) B细胞淋巴瘤在非何杰金氏淋巴瘤约占70 9／6～ 泌学等领域。 80 ，包括弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DI BCL)、套 2 B淋巴细胞免疫球蛋白轻链及检测 细胞淋巴瘤(TCI )、Burkitt’S淋巴瘤(BL)、滤泡性 2．1 免疫球蛋白轻链的限制性 B细胞分化早期， 淋巴瘤(FL)、其他类包括B一小淋巴细胞性淋巴瘤／ 抗原受体基因的重排在B细胞中合成免疫球蛋白， 慢性淋巴细胞性白血病(B—SI L／CLL)、淋巴浆细 在T细胞中合成TCR。免疫球蛋白分子是一个多 胞性淋巴瘤(LPL)以及粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤 聚体，它由两个重链与两个轻链( 或 )的多肽链组 (MALT)_1]。诊断淋巴瘤除了常规组织形态学镜下 成。在不同的阶段或同一阶段上产生几种不同类型 诊断外还常常必须借助免疫组织化学技术(Immu— 的重链，但轻链都为同一型，即 或 。人类编码 、 nohischemical，IHC)、原位杂交(in suit hybridiza— 轻链基因分别位于2、22号染色体上，由85个V 基 tion，ISH)、PCR等辅助方法。检测免疫球蛋白轻链 因片段、5个J 基因片段及一个 C 基因和50—100 、 的限制性是证实B淋巴细胞肿瘤性即克隆性增 个VX基因片段、7个JX—C 基因构成。在B细胞 生的方法之一，原位杂交技术检测免疫球蛋白轻链 中免疫球蛋白基因顺序性地重排，在前一前B阶段 mRNA基因序列，对淋巴瘤是诊断和鉴别诊断意义 开始出现免疫球蛋白重链重排，前B阶段开始出现 非常重大，国内外均有文献报道l_2_”j。现综述如下。 免疫球蛋白轻链重排，即先出现Ig重链基因重排， 1 原位杂交技术 接着是轻链重排。lg 常先重排，功能性重排成功后 1．1 原位杂交技术原理 原位杂交技术(ISH)是以 则抑制IgX的重排(反之亦然)。这种分子机制使一 同位素、生物素、荧光素、抗体、半抗原及其他特异性 个成熟B细胞仅能表达一种免疫球蛋白轻链。因此 化合物标记的特异DNA、cDNA、mRNA为探针，在 免疫球蛋白轻链是B淋巴细胞肿瘤性增生还是反应 染色体、细胞原位研究核酸的分布、数量、表达形态 性增生的重要指标。肿瘤性增生时呈限制性表达， 及其他同细胞的分化、病理生理状态、形态特征演化 即只有一条轻链 或 表达，相反如果检测结果为 之间关系的分子生物学技术。其基本原理是组织内 和 都看到表达，则没有限制性，为增生性病变。因 经热变性而呈单链状态的DNA或mRNA能在适宜 此在B细胞淋巴瘤中，免疫球蛋白轻链 和 往往 条件下，按硷基配对原则[A—T或G—C]借氢键与 呈特异性限制性表达，是B细胞单克隆性增生的标 同源的互补DNA、RNA探针重新结合杂交，然后以 志_2“ ]。6—7最近国外有报道少数 B细胞性肿瘤 一 定的方式将结合了探针的靶DNA、RNA显示出 可以存在轻链蛋白的双表达，结果有待进一步观 来。 察 。 1．2 原位杂交技术的特点 ISH最大的特点是杂 2．2 限制性检测方法及比较 运用IHC的方法从 交可以直接在组织切片上进行。杂交后的信号可在 蛋白质水平检测，判断其限制性有无，检测阳性细胞 光镜、电镜及荧光显微镜下观察，结合组织、细胞的 为细胞浆内淡黄色或棕色颗粒。但是结果背景模 形态结构，可直接观察到某基因序列在某类型细胞 糊，容易因为假阳性或假阴性的增加而误诊或漏诊。 中的位置和数量。这样，定性、定量，又在空间上可 轻链限制率不高，一般