毛细管电泳电化学淌度移动法测定利尿剂和牛血清白蛋白结合常数.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第1期 2009年1月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 115—118 毛细管电泳电化学淌度移动法测定 利尿剂和牛血清白蛋白结合常数 郑丽辉1 郑新宇2 童萍1 陈国南1 张兰“ 1(福州大学食品安全分析与检测教育部重点实验室，运动科学研究中心，福州350002) 2(福建农林大学生命科学学院，福州350002) 摘要采用毛细管电泳淌度移动法研究了利尿剂氢氯噻嗪(HCT)，布美他尼(BMTN)与牛血清白蛋白 em×25 (BSA)的结合常数。使用未涂层的毛细管柱(70pan kV×8 7．4)缓冲溶液，在800mV工作电位，分离电压9kV和电动进样9 S的条件下，测得HCT，BMTN与BSA 的结合常数分别为2．45×104L／moL，1．19×104L／moL。得到的结合常数值与经典紫外分光光度法测定的值 相近。实验表明，本方法可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种快速、简便的检测方法。 关键词毛细管电泳，电化学检测法，结合常数，利尿剂 1 引 言 氢氯噻嗪(HCT)和布美他尼(BMTN)是国际奥林匹克委员会禁用的利尿剂类药物，主要是在涉及 重量级别的项目(如举重、拳击等)中用于减轻体重，或稀释尿液从而用于掩盖其它禁用药物的一种手 段…，因此研究利尿剂与血清蛋白的结合作用机制具有重要意义。毛细管电泳法具有所需样品量少 (pg级)、分析时间短、可以同时研究多种配体对一种受体或多种受体对一种配体的结合行为等优点，近 年来用于研究分子间的相互作用的报道13渐增多旧“J。鉴于牛血清白蛋白(BSA)与人血清白蛋白的氨 基酸组成相似，本研究采用毛细管电泳法测定HCT、BMTN与BSA的结合常数，同时采用传统的紫外分 光光度法对测定的常数加以验证，为利尿剂的药代动力学及在人体中作用机制提供了新的佐证手段。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 自组装毛细管电泳．安培检测装置系统，BAS 360 p,m(O．d)、25¨m(i．d。)(河北永年光纤厂)；高压电源(0～±30kV，中国科学院上海原子核研究)； TL moL／L 9900色谱工作站(北京泰立化电子有限公司)；三电极系统：Ag／AgCI(3。00KCI)电极为参比 电极，铂丝为辅助电极，工作电极为自制的碳圆盘电极(直径为0．3mm)；PHS-3C型酸度计(上海大普 仪器有限公司)；Labomed800紫外可见分光光度计(PerkinElmer公司)。 mmoL／L和4．00 HCT及BMTN分别配制成3．00 mmoL／L的储备液(10mE)。中性标记苯酚溶液溶于适 量的水中，配成1．00 BSA母液南适量BSA溶解于缓冲液中制成。所有储备 mmoL／L溶液。500斗moL／L 液在5℃下冷藏。20 mmol／L硼酸盐缓冲液(Palitzsch，pH 剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 2．2实验方法 2．2．1CE．AD法实验时同定混合溶液中HCT、BMTN的浓度分别为0．15和0．20mmol／L，加入一定 mmol／L 浓度的苯酚溶液作为中性标记物以扣除电渗流的影响，在20 Palitzsch缓冲液(pH7．4)、检测电 kV×8 位800 kV和电动进样9 S的条件下，不断改变缓冲溶液中BSA的含量，进行电泳 mV、分离电压9 分析，并记录每次测定中各组分的保留时间，每次测定重复3次。 2008旬5-23收稿；2008439-27接受 $E—mail：zlan@f