大鼠血清中人参皂甙Rb1的免疫检测.pdfVIP

2007；27(1 2) 南方医科大学学报rJ South Med Univ) ·1915· 大鼠血清中人参皂甙Rbl的免疫检测 马丽玲 ，晁 志2田中宏幸 ，正山征洋 (‘广州医学院护理学院，广东 广州 510180； 南方医科大学中医药学 院，广东 广州 510515； 九州大学药学研究院，日本 福冈 812．0052； 长崎国际大学药学部，日本 长琦 8593298) 摘要：目的建立大鼠血清中人参皂甙Rbl(G．Rb1)的免疫检识方法。方法利用杂交瘤细胞技术制备抗G-Rb1单克隆抗 体(mAb)。含G-Rb1的大鼠血清用甲醇沉淀蛋白，制备供试样品．点样于聚醚砜膜上．以乙腈：水：冰醋酸按25：75：l的比 例展开；NalO4处理，与BSA结合，使G-Rb1固定于膜上。将PES膜上的G．Rbl与抗G．Rbl mAb反应后．加过氧化物 酶标记的羊抗小鼠 G，用含0．03％H20：的l mg／ml 4．氯．1．萘酚磷酸缓冲液显色。结果在聚醚砜膜上，在标准品和供 试样品的相同位置可清晰地观察到一个青蓝色G．Rbl斑点，该方法检测限为0．25 Ixg。结论 这种G-Rb1的免疫检识方 法较薄层层析具有更好的专一性和可靠性，灵敏度接近高效液相色谱。且不需要昂贵的仪器．便于操作。 关键词：人参皂甙Rbl：免疫检识：大鼠血清 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2007)12．1915．03 Immunodeteetion of ginsenoside Rbl in rat serum MA Li-ling ，CHAO Zhi ，Tanaka Hiroyuki ．Shoyama Yukihiro 。School ofNursing，Guangzhou Medical College，Guangzhou 510180，China； School ofTraditional Chinese Medicine，Southern Medical University,WaculD／of Pharmaceutical Sciences，Guangzhou 510515，China；~Nagasaki International University,Nagasaki 859-3298， Japan；~3raduate School ofPharmaceutical Sciences，Kyushu University，Fukuoka 8 1 2-0052，Japan Abstraet：Objective To establish a novel immunoassay for qualitative detection ofginsenoside Rbl in rat serum． Methods Anti-G-Rbl monoclonal antibody(mAb)was through a hyhridoma approach．Rat serum containing G-Rbl was deproteinized with methanol to prepare the sample for testing，which was loaded onto polyethersulfone(PEs)membrane and developed in the mixture ofacetonitrile，water and acetic acid(25：75：1)．After treatment with NaIO4the membrane Was transferred to l％ BSA solution for immobilization ofG-Rb1．nle membrane was subsequently treated with anti．G．Rbl mAb solution．followed by addition ofperoxidase—labeled goat anti·mouse IgG and color development using 4·chloro-1·naphthol·0．03％H2o2．Results On the PES membrane．a clearblue spot representing G-Rbl occurred where the rat