肌动蛋白与肌球蛋白在共同性斜视眼外肌表达研究.docVIP

肌动蛋白与肌球蛋白在共同性斜视眼外肌表达研究[摘要] 目的：研究共同性斜视患者眼外肌与正常人眼外肌的结构差异，探讨共同性斜视的可能发病机制。方法：收集共同性斜视患者弱侧眼外肌进行肌动蛋白和肌球蛋白免疫组织化学染色研究。结果：共同性斜视组慢肌纤维和快肌纤维数目明显减少，但未见肌纤维类型优势分布和肌纤维群组化现象；比较两组间慢肌纤维和快肌纤维数目比值差异无统计学意义（P＞0.05）；肌动蛋白和肌球蛋白的表达明显下降，与对照组相比，差异有显著性意义（P0.01）。结论：共同性斜视弱侧眼外肌发生肌源性的病理学改变；眼外肌纤维减少和收缩蛋白表达减弱在共同性斜视的发病中可能起重要作用；眼外肌快肌纤维和慢肌纤维的数目比例失衡可能不是共同性斜视产生眼位偏斜的原因 [关键词] 共同性斜视 眼外肌组织化学染色免疫组化染色 共同性斜视其发病机制比较复杂，可能与辐凑和分开兴奋不平衡有关，还可能与解剖因素、遗传因素等有相当的联系。视动功能需要快速而有力的肌肉收缩来完成，视静功能需要肌肉长久维持一种姿势张力。本研究分别采用免疫组织化学染色的方法对共同性斜视患者弱侧眼外肌和正常人眼外肌的收缩蛋白和快慢纤维进行研究，现将结果报告如下 1 材料和方法 1.1 材料：收集福建医科大学附属第一医院眼科中心XX年1月至XX年11月共12例共同性斜视患者弱侧眼外肌作为实验组，其中内斜视7例，外斜视5例；男性6例，女性6例；年龄最小7岁，最大25岁，平均14岁；于斜视矫正手术中取其缩短的直肌为标本。收集同期无眼肌疾患行眼球摘除的患者6例作为对照组，于手术中取其直肌为标本。所有标本在离体后用显微手术剪剪成2部分，均为4×4×2mm大小，一份立即置于10%甲醛中性固定液中，石蜡包埋，待用；一份速存于液氮速冻后-80℃保存，待用 1.2 主要试剂：三磷酸腺苷二钠盐（ATP 产地美国，购自上海捷瑞生物工程有限公司）；鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体（购自北京中杉公司）；鼠抗人骨骼肌肌球蛋白单克隆抗体（购自北京中杉公司）； PV9000二步法检测系统（美国GBI公司产品，购自北京中杉公司） 1.3 肌球蛋白及肌动蛋白免疫组织化学步骤：取包埋好的肌组织沿肌肉长轴及纵轴连续切片2张，层厚约为5 μm，脱蜡和水化；3%H2O2去离子水孵育10分钟， PBS液冲洗；滴加一抗 ，37℃孵育一个小时，PBS液 冲洗； 滴加 Polymer Helper， 37℃孵育20min，PBS液冲洗；滴加二抗，37℃孵育20分钟，PBS液冲洗；DAB显色；自来水冲洗，苏木素轻度复染，自来水冲洗返蓝；梯度酒精脱水干燥、二甲苯透明、中性树胶封片 1.4 观察方法：光镜下观察免疫组化染色结果。肌动蛋白和肌球蛋白阳性反应为棕黄色颗粒，主要表达于细胞浆，在放大200倍下对热点视野以OLYMPUS BH2显微摄像系统对切片进行摄像，每张切片取5个视野，每个视野取100个肌纤维作形态学图像分析（JEDR 801D形态学图像分析系统6.0软件，福建医科大学组胚教研室提供），取平均光密度值，数据以“均数#61617;标准差”表示 1.5 数据统计分析方法：运用SPSS 11.5软件包对数据进行处理。组间差异采用成组t检验方法，检验水准α=0.05 2 结果 2.1 肌动蛋白的表达 光镜下棕黄色颗粒为肌动蛋白阳性染色，表达在肌浆中 (图1，图2为免疫组织化学两步法，DAB染色, 苏木素复染，×200） 对照组切片可见明显的棕黄色颗粒；共同性斜视组切片可见棕黄色颗粒表达明显减弱，表明对照组较共同性斜视组肌动蛋白表达明显，平均光密度值较高。两组平均光密度值结果以 表示，组间差异采用成组t检验。结果显示两组间的差异有统计学意义（表1） 2.2 肌球蛋白的表达 光镜下棕黄色颗粒为肌球蛋白阳性染色，表达在肌浆中 (图3，4为免疫组织化学两步法，DAB染色，苏木素复染，×200) 对照组可见明显的棕黄色颗粒；共同性斜视组中可见棕黄色颗粒表达明显减弱，表明对照组较共同性斜视组肌球蛋白表达明显，平均光密度值较高。两组光密度结果以 表示，组间差异采用成组t检验。结果显示两组间的差异有统计学意义（表2） 3 讨论 眼位偏斜不能被融合机能所遏制，眼球运动无障碍，各种方向注视时斜视角保持恒定者，称为共同性斜视。共同性斜视的病因学说不一[2]，主要有：1．调节学说；2．双眼反射学说；3．解剖学说；4．遗传学说。各种学说均有一定的理论根据，但尚无一种学说能够解释所有的共同性斜视的问题 骨骼肌负责运动功能的蛋白质主要是收缩蛋白质，即肌球蛋白和肌动蛋白，它们存在于肌原纤维中。肌球蛋白是粗肌丝的主要成分，具有二个生物学作用：一是具有ATP酶活性，能裂解ATP，释放化学能；二是具有与