蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化.pdfVIP

贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性 钙离子通道电流变化 专业：麻醉学 研究生：符永健 导师：王迪芬 施贤清 摘要 目的:通过全细胞膜片钳技术研究蛛网膜下腔出血（SAH）后基底动脉平滑肌细胞 电压依赖性钙离子通道电流的变化情况。 方法：40 只新西兰大白兔随机分为5 组，每组8 只。分别为蛛网膜下腔出血（SAH） 后24 小时（S1）组、48 小时（S2）组、72 小时(S3)组、假手术（C）组和正常 （N）组。S1-S3 组在静脉麻醉下经枕大池注入非抗凝的自体动脉血(1ml/kg)复 制SAH 模型，C 组经枕大池注入等量的37℃的生理盐水，N 组不予任何操作。S1-S3 组分别在SAH 后24 小时、48 小时和72 小时后在静脉麻醉下取出基底动脉，C 组 在注入生理盐水后72 小时取出基底动脉，N 组直接取基底动脉。用酶溶液Ⅰ(木 瓜蛋白酶0.5mg/ml、二硫赤藓糖醇1mg/ml)和酶溶液Ⅱ（XI 型胶原酶1mg/ml） 分两步进行酶消化分离各组基底动脉平滑肌细胞。通过全细胞膜片钳技术记录各 组细胞膜电容、电压依赖性钙离子通道电流,在细胞浴液中加入电压依赖性钙离 子通道阻断剂硝苯地平 （1 ｕmol/l），验证各组所记录到的电流是否为电压依赖 性钙离子通道电流。 结果：各组细胞数量、大小、膜电容无明显差异（P0.05），S1-S3 组电压依赖 性钙离子通道电流较C 组和N 组增大（P0.05），与S1 和S2 组相比，S3 组电流 增大更为显著（P0.01），C 组和N 组电流无明显差异（P0.05）。钙离子通道阻 断剂硝苯地平能够有效抑制各组电压依赖性钙离子通道电流(P0.05)。 结论：蛛网膜下腔出血（SAH）后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电 流增大，以S3 组电流增大最为显著。硝苯地平能够有效抑制各组电压依赖性钙 离子通道电流。 关键词：蛛网膜下腔出血 基底动脉平滑肌细胞 电压依赖性钙离子通道电流 3 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 前言 蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）是神经外科常见病，SAH 后脑血管痉挛 (cerebral vasospasm, CVS)是其严重并发症，是致死致残主要病 因之一。因此 SAH 后 CVS 的发生机制的研究对早期防治CVS 有重要意义，目前人 们对 CVS 的机制仍没有完全清楚，涉及到 SAH 后 CVS 发生机制的研究较少,特别 是对于 SAH 后脑血管平滑肌内离子通道功能及相关电生理改变情况的研究报道 2+ 更少。有研究表明：SAH 后各种离子通道如钾、钙离子 (calcium ion Ca )通道 功能失调，进而引起脑血管平滑肌细胞(smooth muscle cells SMCs)膜电位去极 化及引起钙离子通道开放概率增加，使钙离子内流增加，引起脑血管平滑肌收缩， ［1-3］ 造成 CVS 。而功能性电压依赖性钙离子通道 (voltage-dependent calcium 2+ channels VDCCs)是血管平滑肌细胞外 Ca 流入细胞内的主要通道，通过调节平 ［4-6］ 2+ 滑肌细胞内钙离子浓度来调控血管平滑肌的舒缩性能 。Ca 通过电压依赖性 钙离子通道进入血管平滑肌细胞将会引起通道电流的改变，使平滑肌张力增加， ［7］ 进而引起平滑肌收缩 。因此电压依赖性钙离子通道在维持血管平滑肌张力上有 重要作用。CVS