矿产资源微生物技术-3微生物技术基本实验.pptVIP

为什么不同有机基团会产生不同的红外光谱？ ＊ -OH、-SH、-NH等化学键存在振动。 ＊ 振动形式有：伸缩振动、弯曲振动。 ＊弯曲振动包括： 面内弯曲（剪式振动 、平面摇摆振动） 面外弯曲（ 非平面摇摆振动、扭曲振动） ＊伸缩振动包括： 对称伸缩振动、不对称伸缩振动 ＊ 化学键振动存在振动频率、存在振动能级。没 有外界干扰时，分子处于最低的振动能级。 ＊ 当红外光线照射到有机基团的化学键上时，分 子发生振动能级跃迁，跃迁需要吸收一定的能 量，该能量通常由照射的红外光线来供给。 ＊ 化学键的键能、键长、键角、种类如单键、双 键、叁键、共价键、离子键等是决定吸收多少 能量的内在因素，也就是决定红外光谱的峰位、 形状、峰强的内在因素。反过来说，红外光谱 可以提供分子内部键参数的信息。 红外光谱基本原理 红外光谱基本原理 ＊ 红外光谱所提供的能量与有机基团结构的振 动能级差相吻合； ＊ 紫外光线、可见光线提供的能量则不与有机 基团结构的振动能级相匹配； ＊ 红外光线提供的能量不与无机物的分子结构 振动能级相匹配！ 红外光谱识谱法 1、三个重要特征 * 谱带位置：基团的最有用的特征，给出基团的信息 * 谱带形状：给出基团信息 * 谱带的相对强度：给出两个信息， 一是定量的概念；二是指示某特殊基团或元素存在 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 苦味诺卡氏菌的红外光谱 Wavenumber cm-1 Transmittance % Transmittance % 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Wavenumbers cm-1 吸附了Pb2＋的诺卡氏菌 红外光谱图 吸附了Zn2＋的诺卡氏菌 红外光谱图 诺卡氏菌的红外光谱 红外光谱分析表明，诺卡氏菌细胞成分中含有－OH、－SH、－NH2、－OP、C＝O、P＝O、S＝O等大量基团。当细菌表面遇到重金属离子时，这些基团都含有大量的孤电子对，可以成为电子供体。 * 吸收谱带区：分子中各键的振动频率常常受到整个分子的影响，但是有些键如羰基、—OH、—NH等因吸收峰位于高频区，故受分子中其他结构的影响较小，高频区4000～1333 cm－1的吸收峰比较稀疏，易于辨认，通常也叫特征谱带区、该区能用来鉴定官能团存在的吸收峰称作特征吸收峰。 * 指纹区：低频区1333～667 cm-1，这一区域谱带特别密集，犹如人的指纹，各种化合物在结构上微小差别在指纹区都会得到反映，因此，对鉴别有机化合物很有用处。 * 相关峰：一个基团常有数种振动形式，每种红外活性的振动通常都相应地产生一个吸收峰，习惯上把这些相互依存而又相互佐证的吸收峰叫做相关峰。 红外光谱识谱法 （三个区） 七、菌体的扫描电镜样品制备方法 ＃ 微生物样品在用于扫描电镜观察之前，需经过清洗、 固定、脱水等步骤。 ＃固定是指用化学固定剂迅速杀死细胞的过程。固定 的目的是尽可能使细胞中的各种物质保持生活状态 的结构，并且牢固地固定在它们原来所在的位置上。 经过良好固定的细胞物质，不会由于后序的脱水处 理而发生移位或丢失。 扫描电镜样品制备方法 扫描电镜生物样品的制备步骤如下： (1) 1％戊二醛溶液的配制：取50 mL 0.2 mol/L磷酸缓 冲溶液于100 mL容量瓶中，加入4 mL 25％戊二醛 （市售的常见浓度）水溶液，加蒸馏水至满刻度。 (2) 把离心分离后的细菌放入10 mL配制的1％戊二醛溶 液中固定20～30 min，固定时采用搅拌，使材料均 匀地分布在固定液中。 (3) 离心分离（16000 r/min），使固定液与 细菌分开，弃去上清液。 (4) 用磷酸盐缓冲溶液（0.1mol/L， pH 7.2）漂洗并