第02章 核酸的结构与功能(生化).ppt

第二章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid 主要内容 核酸概述 核酸的分子组成 DNA的结构与功能 RNA的结构与功能 核酸的理化性质 核酸酶（增加） 两种重要的生物大分子（增加） 学习指导 重 点： 1. 各类核酸结构特点以及与其功能的关系。 2. 核酸的理化性质。 难 点： 1. DNA结构多样性 2. 分子杂交及其应用。 进 展：探针技术 DNA的一级结构 是指DNA中脱氧核苷酸的排列顺序。 由于脱氧核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 DNA中A=T, G=C，这一规律暗示着A与T，G与C相互配对的可能性，为Watson和Crick提出DNA双螺旋结构提供了重要依据。 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 Prokaryotic chromosomes The circular DNA is packaged into a region of the cell called the nucleoid where it is organized into 50 or so loops or domains that are bound to a protein scaffold, attached to the cell membrane. RNA的一级结构 RNA中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 核酸的酸碱性质 核酸为两性电解质（多元酸），具有较强的酸性。 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行为：不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 两种重要的生物大分子 Summary 1. 核酸包括DNA和RNA。DNA携带遗传信息，RNA参与遗传信息的复制与表达。 2. 核酸的基本组成单位是核苷酸。 3. 核酸的基本结构。 4. DNA为双链结构，RNA的结构以单链为主。 5. DNA的二级结构为双螺旋结构。 6. mRNA、tRNA、rRNA结构特点与功能。 7. DNA的理化性质。 思考题 1. 核酸的一级结构、DNA变性、核酸分子杂交。 2. 核酸的紫外吸收性质。 3. DNA双螺旋结构模型的要点。 4. 真核生物内DNA的高级结构形式：核小体。 5. 真核生物mRNA的结构特点。 6. hnRNA与mRNA的关系。 7. 相对富含稀有碱基的核酸：tRNA。 8. DNA的Tm值与其所含的G+C比例的关系。 End 增色效应 (hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液A260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 解链温度 (melting temperature, Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化 三、变性的核酸可以复性或形成 杂交双链 当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性 (renaturation) 。 减色效应：DNA复性时，其溶液A260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火 (annealing) 。 不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链 (heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交 (hybridization) 核酸分子杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用（探针技术） 第五节核酸酶 Nuclease 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或 3′→5′核酸外切酶。 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶。 5’ 5’ 3’ 3’ 外切位点 外切位点 内切位点 内切位点 参与DNA的合成、修复以及RNA的剪接。 清除多余的、结构和功能异常的核酸，以及侵入细胞的外源性核酸